3. Питательные среды Для испытания на стерильность используют жидкие питательные среды тиогликолевую, соево-казеиновую или Сабуро. Тиогликолевую среду применяют для выявления аэробных и анаэробных бактерий. Жидкую соево-казеиновую среду для выявления грибов и аэробных бактерий. Жидкую среду Сабуро используют для выявления грибов.
При испытании на стерильность БЛП не рекомендуется использовать жидкую среду Сабуро.
При испытании на стерильность БЛП, в том числе содержащих ртутные консерванты, допустимо использование только тиогликолевой среды в качестве универсальной для выявления аэробных и анаэробных бактерий и грибов (при условии соответствия её ростовых и нейтрализующих свойств в отношении тест-микроорганизмов в соответствии с Таблицей 3). Инкубацию посевов в этом случае осуществляют при двух температурных режимах.
3.1. Приготовление питательных сред Питательные среды готовят в лабораторных условиях, используя сухие питательные среды промышленного производства или отдельные компоненты. Допускается применение питательных сред, готовых к использованию.
Питательные среды стерилизуют, как правило, при температуре 121оС в течение 15 мин.
Тиогликолевая среда
L-цистина - 0,5 г
Натрия хлорида - 2,5 г
Глюкозы моногидрата - 5,5 г
Агара микробиологического (влажность не более 15 %) - 0,75 г
рН после стерилизации 7,1 ± 0,2.
Добавляют в воду очищенную L-цистин, агар микробиологический, натрия хлорид, глюкозу, водорастворимый дрожжевой экстракт и панкреатический гидролизат казеина и нагревают до полного растворения. После этого вносят натрия тиогликолят или тиогликолевую кислоту и, если необходимо, доводят рН среды 1 М раствором натрия гидроксида до необходимого значения. При необходимости фильтруют для получения прозрачной среды. Добавляют раствор резазурина, перемешивают, разливают в ёмкости и стерилизуют.
Жидкая соево-казеиновая среда
Панкреатического гидролизата казеина - 17,0 г
Папаинового гидролизата соевой муки - 3,0 г
Натрия хлорида - 5,0 г
Калия фосфата двузамещенного - 2,5 г
Глюкозы - 2,5 г
Воды очищенной - 1000,0 мл
рН после стерилизации 7,3 ± 0,2
Компоненты растворяют в воде очищенной (если необходимо при нагревании). Охлаждают при комнатной температуре и, если необходимо, доводят рН среды 1 М раствором натрия гидроксида до необходимого значения. Фильтруют для получения прозрачной среды, разливают в ёмкости и стерилизуют.
Жидкая среда Сабуро
Пептона ферментативного - 10,0 г
Глюкозы моногидрата - 40,0 г
Воды очищенной - 1000,0 мл
рН после стерилизации 5,6 ± 0,2
Компоненты добавляют в воду очищенную и полностью растворяют при слабом нагревании. Охлаждают до комнатной температуры и доводят рН до требуемого значения. Если необходимо, фильтруют, разливают в ёмкости и стерилизуют.
Допускается замена отдельных компонентов в составе сухих и готовых к применению сред промышленного производства на аналогичные, при условии их соответствия требованиям по ростовым свойствам.