Учебное пособие Персиановский 2019 ббк 28. 57 Ф 50
жүктеу/скачать 1,45 Mb.
|
Физиология и биохимия Гужвин СА 2019 172с.
- Бұл бет үшін навигация:
- АН 2 + О 2 → А + Н 2 О 2
- 2Н 2 О 2 → 2Н 2 О + О 2 .
РАБОТА 35Количественное определение активности каталазы по Баху и Опарину В процессе окисления ряда веществ в растениях под действием оксидаз образуется перекись водорода: АН2 + О2 → А + Н2О2,где АН2 – восстановленный субстрат; А – окисленный субстрат. Перекись водорода в повышенных концентрациях оказывает токсическое действие на цитоплазму клеток. Под действием фермен- та каталазы перекись водорода разлагается на воду и кислород: 2Н2О2 → 2Н2О + О2.В результате этого каталаза освобождает растительные клетки от ядовитого воздействия перекисных соединений. Цель работы: определить активность каталазы в 1 г зерна за 1 час. Объект исследований: семена пшеницы (Triticum aesticum). Ход работы. Взять 1 г семян и растереть в ступке до однород- ной массы. Отмерить 50 мл дистиллированной воды и этим количе- ством по стеклянной палочке смыть все со ступки в коническую кол- бу. Колбу оставить отстаиваться на 1 час. На протяжении первого получаса содержимое колбы встряхи- вать, за полчаса до фильтрования взбалтывание прекратить. По исте- чении часа жидкость отфильтровать через складчатые фильтры, предварительно смоченные водой. После этого взять по 20 мл филь- трата в две колбы – для опыта и контроля. В контрольную колбу немедленно влить 10 мл 10%-ной серной кислоты для инактивации фермента. Затем в обе колбы прилить по 20 мл воды и 3 мл 1%-ной перекиси водорода. Опытную колбу оставить отстаиваться 15 минут (за это время под действием каталазы будет происходить разложение перекиси), а контрольную колбу оттитро- вать 0,1 н. раствором перманганата калия до слабо-розовой окраски, не исчезающей в течение 30 секунд. Через 15 минут в опытную колбу прибавить 10 мл 10%-ной серной кислоты для прекращения работы фермента и также оттитровать. Титрование идет по уравнению: 2KMnO4 + 5H2O2 + 4H2SO4 = 2KHSO4 + 2MnSO4 + 8H2O + 5O2.После титрования раствор перманганата калия слить из бюретки и промыть ее щавелевой кислотой и водой. После этого провести расчет активности каталазы. Найти, сколько растительной массы содержится во взятых 20 мл вытяжки (А), если на 50 мл приходится 1г сырого вещества: 50 мл – 1 г; 20 мл – А г. Определить разность между количеством 0,1 н. раствора пер- манганата калия, пошедшего на титрование в контрольной и опытной колбе (В). Найти активность каталазы в одном грамме сырого веса веще- ства, выраженную в мл 0,1 н. раствора перманганата калия: жүктеу/скачать 1,45 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|