Ферменты,  применяемые  при  конструировании

Глава  8.  ГЕННАЯ  ИНЖЕНЕРИЯ  В  ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ 
БИОТЕХНОЛОГИИ 
 
 
91 
 
 
ферменты, изменяющие строение концов фрагментов ДНК. 
Рестриктазы (эндонуклеазы рестрикции) – ферменты, с помощью 
которых  «вырезают»  фрагменты  ДНК.  Самая  первая  рестриктаза  Eco  RI 
была  выделена  из  E. сoli.  Эти  высокоспецифичные  ферменты  узнают  и 
расщепляют  определенные  последовательности  азотистых  оснований  в 
молекуле ДНК (сайты рестрикции).  
В  результате  действия  рестриктаз,  как  правило,  образуются 
фрагменты (рестрикты) ДНК с уступами, т.е. на концах одна цепь длиннее 
другой,  что  образует  своеобразный  «хвост».  Такие  концы  (хвосты) 
получили  название  «липких»  концов,  т.  к.  они  способны  к 
самокомплементарности.  В  результате  рестрикции  также  могут 
образовываться и «тупые» концы (рисунок 8.1). 
 
 
Рисунок 8.1 – «Разрезание» молекулы ДНК эндонуалеазами рестрикции с образованием 
«липких» и «тупых» концов 
 
Обратные  транскриптазы,  ДНК-полимеразы  –  ферменты, 
синтезирующие  ДНК  на  матрице  ДНК.  В  генной  инженерии  часто 
используется  ДНК-полимераза  I,  выделенная  из  клеток  Е. coli  (Pol  I). 
Фермент  состоит  из  мономерной  полипептидной  цепи  с  молекулярной 
массой 103 кДа и имеет 3-х доменную структуру.  
РНК-зависимая  ДНК-полимераза  (ревертаза)  –  это  фермент, 
который  используют  для  синтеза  комплементарной  цепи  ДНК  на  базе 
мРНК. 
Лигазы  –  ферменты,  которые  «сшивают»  фрагменты  ДНК  за  счет 
фосфодиэфирных  связей,  образующихся  между  3'-гидроксильной 

жүктеу/скачать 2,61 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: