О книге Special for Dabl-v aka Эукариот Фрида Карловна Черкес, Лина Борисовна Богоявленская, Наталья Александровна Бельская – Микробиология



Pdf көрінісі
бет114/305
Дата20.12.2022
өлшемі14,39 Mb.
#58441
түріУчебник
1   ...   110   111   112   113   114   115   116   117   ...   305
Байланысты:
8dccb36

Гемолитическая сыворотка (гемолизин). Сыворотку разводят в 3 раза 
меньше ее титра. Готовят общее разведение сыворотки для всего опыта; объем 
которого определяют, умножив объем сыворотки в одной пробирке (например, 
0,5 мл) на число пробирок, немного превышающее число их в опыте
*

*
(
Избыток жидкости необходим при приготовлении всех компонентов реакции: часть ее остается на 
стенках пробирок, колб, пипеток.

2. 
Эритроциты барана. Готовят 3% взвесь отмытых эритроцитов барана на 
все количество пробирок в опыте. 
Для приготовления гемолитической системы за 30 мин до внесения ее в 
опыт смешивают равные объемы разведенного гемолизина и взвеси 
эритроцитов, приливая сыворотку к эритроцитам, тщательно перемешивают и 
инкубируют 30 мин при 37° С (сенсибилизируют). 
3. 
Комплемент обычно разводят 1:10. Перед каждым опытом его 
обязательно титруют. Титр комплемента - это его наименьшее количество, при 
добавлении которого к гемолитической системе происходит полный гемолиз в 
течение 1 ч при 37° С. Схема титрования комплемента представлена в табл. 21. 


 
Таблица 21. Схема титрования комплемента 
Примечание. Общий объем жидкости в пробирках 2,5 мл. 
Внимание! Титруют комплемент в таком же объеме, в каком ставят 
основной опыт, заменяя изотоническим раствором недостающие ингредиенты. 
Учет результатов. В контролях не должно быть даже следов гемолиза, так 
как в одном из них нет комплемента, в другом - гемолизина. Контроли 
свидетельствуют об отсутствии у компонентов реакции гемотоксичности 
(способности спонтанно лизировать эритроциты). 
В приведенном в табл. 21 примере титр комплемента в разведении 1:10 
равен 0,15 мл. В опыте активность комплемента может снизиться за счет 
неспецифической адсорбции его другими компонентами реакции, поэтому для 
опыта количество комплемента увеличивают: берут следующую за титром 
дозу. Это - рабочая доза. В приведенном примере она равна 0,2 мл комплемента 
в разведении 1:10. Так как все компоненты, участвующие в РСК, должны быть 
взяты в равных объемах (в нашем примере он равен 0:5 мл), необходимо к 
рабочей дозе комплемента (0,2 мл 1:10) добавить 0,3 мл изотонического 
раствора. Для всего опыта объем каждого из них (комплемента и 
изотонического раствора) умножают на число пробирок, участвующих в РСК. 
Например, для проведения опыта в 50 пробирках нужно взять 10 мл 
комплемента 1:10 (0,2 мл × 50) и 15 мл изотонического раствора (0,3 мл × 50). 


4. 
Антиген обычно получают готовым с указанием его титра, т. е. того 
количества, которое после разведения антигена должно содержаться в 1 мл. 
Например, при титре 0,4 его разводят в 0,96 мл изотонического раствора. В 
опыт берут количество антигена, равное половине титра (0,5 мл). Это его 
рабочая доза. Готовят общее разведение антигена для всего опыта, умножая 
0,5 мл на число пробирок в опыте. 
5. 


Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   110   111   112   113   114   115   116   117   ...   305




©emirsaba.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет