ВЕТЕРИНАРИЯ
95
комплекса, поскольку длительная эксплуатация
помещений и технологических оборудований
приводит к накоплению как
условно патогенной,
так и патогенной микрофлоры [
1
]. Современные
дезинфицирующие средства должны отвечать
следующим требованиям: широкий спектр бакте
-
рицидного, вирулицидного и фунгицидного дей
-
ствия; низкая токсичность для теплокровных; от
-
сутствие коррозийных свойств; безопасность для
окружающей среды; совместимость с обрабаты
-
ваемыми материалами; активность в широком
диапазоне температур; отсутствие канцероген
-
ных, тератогенных, иммунодепрессивных свой
-
ств; пожаро
-
и взрывобезопасность; устойчи
-
вость к органической нагрузке; экономичность и
удобство применения [
2].
Текущая ситуация в органической химии
отражает дефицит новых структур
-
лидеров, ко
-
торые могут быть оптимизированы до промыш
-
ленно пригодных препаратов. В развитии иссле
-
дований по комплексному изучению многофунк
-
циональных субстратов заложен потенциал по
-
лучения инновационных соединений с уникаль
-
ными биологическими свойствами. Полифунк
-
циональные азагетероциклы, в частности заме
-
щенные пиперидины, как один из перспективных
классов химических соединений вследствие их
высокого фармакологического потенциала и
простоты синтеза [
3,7,8, 9
], являются объектами
исследований многих крупных мировых иссле
-
довательских центров. Синтетический дизайн ге
-
тероцикланов привлекает интерес из
-
за широко
-
го спектра проявляемой биологической активнос
-
ти –
от антибактериальной до психотропной.
Введение в молекулу гетероциклов других
фармакофорных фрагментов приводит к появле
-
нию у них новых видов биологической актив
-
ности
[4,10,11,12].
Экспериментальная химическая часть
.
Ход реакции и индивидуальность соединений
контролировали
методом ТСХ на Al
2
O
3
II степени
активности с детектированием парами иода. ИК
спектры записаны на спектрометре «Nicolet 5 700
FT -
IR» в тонкой пленке.
Гидрохлорид
1-
бензил
-4-(
циклопропанкар
-
бонилоксиимино
)
пиперидина
(I).
В круглодонную,
трехгорлую колбу, снабженную механической
мешалкой, обратным холодильником и капель
-
ной воронкой помещают 3,0 г (0,015 моль) 1
-
бензилпиперидин
-4-
кетоксима
(III)
растворенного
в абсолютном диоксане и медленно прикапыва
-
ют раствор 2,3 г (0,022 моль) циклопропанкар
-
бонилхлорида в абсолютном диоксане. Реак
-
ционную смесь при перемешивании нагревают в
течение 1 ч при температуре ~60°С и оставляют
при комнатной температуре на 24 ч. Диоксан
упаривают досуха на роторном испарителе. Ос
-
таток промывают диэтиловым эфиром, кристал
-
лический продукт отфильтровывают и перекрис
-
таллизовывают из изопропанола. Получают 3,27
г (68,0% от теоретического) гидрохлорида
1-
бензил
-4-(
циклопропанкарбонилоксиимино
)
пиперидина
(I)
в виде белых кристаллов с т.пл.
163-164
о
С,
R
f
0,89 (Al
2
O
3
, элюент: бензол: диок
-
сан
- 4:1).
Найдено, % : С
63,96
; Н
6,92.
С
16
H
21
N
2
O
2
Cl.
Вычислено, % : С 63,63; Н 7,23.
ИК спектр ν, см
-1
: 1757(C
═
O); 1654 (C=N).
Экспериментальная биологическая часть.
Исследования биологических свойств гидро
-
хлорида
1-
бензил
-4-(
циклопропанкарбонилокси
-
имино
)
пиперидина под лабораторным шифром
СХВ
-6
проводились в лаборатории «Гигиена и
санитария объектов ветеринарного надзора» ка
-
федры ветеринарно
-
санитарной экспертизы и
гигиены
и ветеринарной клиники
Казахского на
-
ционального аграрного университета.
В качестве тест
-
штаммов использованы
стандартные типовые культуры микроорганиз
-
мов:
·
Staphylococcus aureus 209-P
(золотистый
стафилококк)
;
·
Escherichia coli 1257
(кишечная палочка)
.
Для исследования антимикробной актив
-
ности препаратов в стерильные чашки Петри с
плотной питательной средой вносили 1 мл 2
-
х
млрд. взвеси (в физиологическом растворе хло
-
рида натрия) культуры микроорганизмов. Через
20-
30 мин после дифундирования микроорга
-
низмов в агар на поверхности засеянной среды
делали лунки диаметром 8 мм на расстоянии 4
см друг от друга. В лунки помещали по 0,1 мл
испытуемого средства. После экспозиции в тер
-
мостате при 37
0
С в течении 18
-
24 ч учитывали
результаты по размерам зоны отсутствия роста
микрорганизмов вокруг дисков:
«устойчивый»
(микроорганизм устойчив к действию препарата)
-
зона отсутствия роста не превышала 10 мм;
-
«малочувствительный» –
11-
14 мм;
-
«чувствительный»
- 15-
24 мм;
-
«высоко
-
чувствительный» –
более 25 мм.
Острую
токсичность и местно
-
раздражаю
-
щее действие
на слизистые оболочки глаза СХВ
-
6
определяли согласно МУ «Оценка токсичности
и опасности дезинфицирующих средств, МУ
1.2.1105-02
» [5].
Изучение острой токсичности осуществля
-
ли путем перорального введения лабораторным
животным (белые мыши обоего пола живой
массой 20
-
22 г) испытуемого раствора СХВ
-
6 с
помощью шприца с тупой иглой, имеющим на
конце булавовидное расширение. А для контро
-
ля в желудок лабораторных животных вводили 1
мл дистиллированной воды. Острую токсичность
оценивали по 4 классам опасности согласно
классификации по ГОСТу
12.1.007-76 [6].
Местно
-
раздражающее действие на
глаза
испытуемого средства
в 3
%-
ной
концентрации
оценивали
на кроликах по шкале, отмечая выра
-
женность
гиперемии и отека конъюнктивы,
инъекцию сосудов склеры, состояние
роговицы и
радужной оболочки, количество и качество вы
-
делений из
глаза
.
ВЕТЕРИНАРИЯ
96
Результаты обследования каждого живот
-
ного суммируются, и выносится заключение о
степени и характере поражения глаз при дейст
-
вии на него изучаемого соединения или средст
-
ва. Указывается характер конъюнктивита (повер
-
хностный, глубокий), наличие кератита. Класс по
раздражающему действию оценивается по клас
-
сификации
выраженности
раздражающих
свойств (табл.
1).
Таблица
1 -
Классификация по выраженности раздражающих свойств
дезинфицирующих
средств на глаза
Выраженность раздражающего
действия
Средний суммарный балл,
конъюнктива (А+Б+В)
+ роговица (А+Б)
Классы
Резко выраженное
более
11
1
Выраженное
7-10
2
Умеренное
4-6
3
Слабое
1-3
4
Отсутствие
0
5
Для исследования гематологических пока
-
зателей крови кроликов при обработке кожи
СХВ
-6 3 %-
ной
концентрации
сформировано
2
группы кроликов, по
4
голов в каждой. Все кроли
-
ки
находились в одинаковых условиях кормления
и содержания в соответствии с зоогигиеничес
-
кими параметрами. Кроликам
контрольной групп
-
пы вводили физиологический раствор хлорида
натрия. Кровь брали из краевой ушной
вены
кроликов
.
Ранее найдено, что пиперидинсодержащие
оксимы и их производные [5,6] обладают широ
-
ким спектром биологического действия. Кроме
того, фармакофорность циклопропанкарбониль
-
ного фрагмента [7,8] также послужила допол
-
нительным аргументом для конструирования
потенциального
антимикробного средства
:
Ацилирование 1
-
бензилпиперидин
-4-
кеток
-
сима
(
1)
циклопропанкарбонилхлоридом привело
к образованию гидрохлорида
1-
бензил
-4-(
цикло
-
пропанкарбонилоксиимино
)
пиперидина
(2)
(СХВ
-
6). Реакцию проводили в абсолютном диоксане
при нагревании, ацилирующий агент взят в не
-
большом избытке. Гидрохлорид
(2)
представляет
собой белый кристаллический порошок с т.пл.
163-164
о
С (изопропанол), растворимый в воде,
этаноле, ацетоне.
Антимикробная активность СХВ
-
6 оценива
-
лась в сравнении с применяемым препаратом
Йодизол
в сопоставимых условиях
в двух кон
-
центрациях
(табл.
2).
Таблица
2
–
Антимикробная активность СХВ
-
6 и Йодизола
Бактерицидная активность (мм) в отношении
1 %-
ная
концентрация
3 %-
ная концентрация
E. Coli 1257
St. aureus 209-P
E. Coli 1257
St. aureus 209-P
СХВ
-6
Задержка роста
микроорганизмов в
лунке
15 ±
0,1
Задержка роста
микроорганизмов в
лунке
2
5 ±
0,3
Йодизол
19
±0,
2
16
±0,
2
37
±0,
3
31
±0,
2
Оказалось, что тест
-
штаммы отличаются
по своей чувствительности к действию СХВ
-6.
Более чувствительным оказался
Staphylococcus
aureus 209-P
, менее –
E. Coli 1257.
Диаметр зоны задержки роста микроорга
-
низмов показывает степень чувствительности их
к различным концентрациям испытуемых
сред
-
ств. Так,
E.coli
и
St.aureus
к
1
% концентрации
СХВ
-6
малочувствительны (задержка роста ми
-
ВЕТЕРИНАРИЯ
97
кроорганизмов в лунке и 15 мм соответственно),
а к препарату «Йодизол»
-
чувствительны. В
3%-
ной
концентрации СХВ
-6
диаметр зоны задержки
роста для
E
.с
oli
в лунке, а для стафилококка
- 25
мм. Эти показатели при применении препарата
«Йодизол» соответственно составили
37
мм и
31
мм.
Острую токсичность препарата устанав
-
ливали по показателю ЛД
50
. Для установления
величины ЛД
50
СХВ
-6
проведен ряд предвари
-
тельных опытов с регистрацией каждыйого слу
-
чая гибели и клинического проявления токсичес
-
ких реакций на вводимые дозы образца
(табл. 3)
.
Таблица 3
-
Параметры острой токсичности
СХВ
-6
Испытуемое
средство
Доза,
мг/кг
Количествов
о
животных
Пало
Выжило
Летальность,
%
СХВ
-6
600
6
0
6
0
1000
6
0
6
0
1500
6
1
5
16
2000
6
2
4
33
2500
6
3
3
50
3000
6
4
2
67
3500
6
5
1
84
4000
6
6
0
100
Максимально переносимая доза СХВ
-6
для взрослых белых мышей равна
600
мг/кг,
абсолютно смертельная доза –
4000
мг/кг, сред
-
нелетальная (
LD
50
)
–
2500
мг/кг. Согласно ГОСТ
12.1.007-76
СХВ
-6
относится к малотоксичным
веществам (
IV
класс опасности).
Клинические признаки отравления подо
-
пытных мышей начинались проявляться уже че
-
рез 10
-
30 мин
после перорального ведения
испытуемого препарата. У животных отмечалась
вялость, снижение активности в движениях,
шерстный покров был взъерошен, они забива
-
лись в углы клетки, позже наблюдалась их ги
-
бель. Перед гибелью отмечались клонические
судороги.
Результаты оценки местно
-
раздражающего
действия
на слизистую оболочку глаза кролика
приведены в таблице 4.
Таблица 4
-
Местно
-
раздражающее действие на слизистые оболочки глаза кролика
№ Кролик
Роговица
Конъюктива
Сумма
Общая
сумма
баллов
А
Б
А
Б
В
Роговица
Конъюктива
1
0
0
0
1
1
0
2
2
2
0
0
0
1
1
1
2
3
3
0
0
0
1
1
1
2
3
4
0
0
0
1
1
1
2
3
Итого
3
Суммарный балл равен 3, и согласно МУ
12.1105-
02 СХВ
-
6 относится к 4 классу опасности
химических веществ по токсикологическим свой
-
ствам.
Установлено, что все показатели крови на
-
ходились в пределах физиологической нормы
и
были достаточно постоянными
(табл.5), хотя от
-
мечена тенденция увеличения изучаемых пока
-
зателей крови, но на 10
-
е сутки они стали близки
к иходным значениям. Несмотря на то, что коли
-
чество
лейкоцитов находилось в пределах физи
-
ологических границ, через сутки после введения
препарата количество увеличилось на 13
%.
Таблица 5
-
Динамика
изменения гематологических показателей крови кроликов при
обработке их кожи СХВ
-6
Показатели крови
Норма
До
обработки
Через
сутки
Через
5 суток
Через 10
суток
Лейкоциты,тыс./мм
3
2,6-9,9
9,6±0,12
11,0±1,6
10,3±1,3
9,8±1,6
Лимфоциты, %
25-85
44,6±2,3
47,7±2,6
51,2±2,1
49,3±1,9
Моноциты, %
2-10
8,2±0,10
10,0±0,17
9,9±0,16
10,2±0,17
Гранулоциты, %
20-80
45,4±2,3
48,2±2,0
51,9±2,1
50,0±1,7
Эритроциты, ×
10
12
/
л
5,2-7,8
8,1,±0,14
8,9±0,12
8,4±0,11
8,6±0,11
Гематокриты, %
35-48
43,6±1,9
47,1±1,7
45,5±1,6
47,7±1,1