1. Классификация микроорганизмов по морфологическим свойствам, и их расположение в мазке. Привести примеры. Шаровидныебактери и
жүктеу/скачать 265,13 Kb.
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Постановка опыта трансдукции.
- 25. Трансформация, определение, постановка опыта, интерпретация результатов
| Механизм трансдукции: в процессе репродукции некоторых умеренных фагов небольшие фрагменты ДНК бактерий-доноров встраиваются в геном фага, который переносит их в бактерии-реципиенты. Различают 3 типа трансдукции: генерализованную (общую), специфическую и абортивную.
При общей трансдукции происходит перенос любого маркера или нескольких маркеров. При специфической трансдукции передается тесно сцепленная группа генов, контролирующая утилизацию галактозы, и не передаются гены, детерминирующие утилизацию других углеводов, способность синтезировать аминокислоты, чувствительность к антибиотикам и др. Для абортивной трансдукции характерной особенностью является то, что внесенный фагом фрагмент нуклеотида не включается в нуклеотид реципиента; он локализуется в цитоплазме и при делении передается только одной дочерней клетке, вторая клетка содержит генетический аппарат реципиента. Постановка опыта трансдукции. Смешивают по 1 мл трехчасовой бульонной культуры реципиента и трансдуцирующего фага. Смесь инкубируют 60 мин при +370С, готовят серию десятикратных разведений. Из пробирки с разведением 10-6 по 0,1 мл культуры высевают на среду Эндо и инкубируют в течение суток. Рекомбинантные клетки растут с образованием малиновых с металлическим оттенком колоний. 25. Трансформация, определение, постановка опыта, интерпретация результатов Трансформация — непосредственная передача генетического материала (фрагмента ДНК) донора реципиентной клетке. Впервые воспроизведена Ф. Гриффитсом в 1928 г. в опытах с авирулентным бескапсульным штаммом пневмококка, который приобрел вирулентные свойства при одновременном введении в брюшную полость белых мышей с убитыми капсульными вариантами этих же бактерий. В дальнейшем было показано, что вирулентные свойства передаются in vitro при обработке авирулентных бескапсульных пневмококков экстрактом убитых капсульных пневмококков. В 1944 г. О. Эвери, К. Мак-Леод и К. Мак-Карти установили, что активным началом, содержащимся в экстракте убитых пневмококков, является ДНК, которая определяет его генетические свойства и является носителем генетической информации. Трансформирующей активностью обладают двунитевые фрагмент ДНК. Процесс трансформации бактерий можно подразделить на несколько фаз: 1) адсорбция ДНК-донора на клетке-реципиенте; 2) проникновение ДНК внутрь клетки-реципиента; 3) соединение ДНК с гомологичным участком хромосомы реци- пиента с последующей рекомбинацией. После проникновения внутрь клетки трансформирующая ДНК деспирализуется. Затем происходит физическое включение любой из двух нитей ДНК донора в геном реципиента. Эффективность спаривания трансформирующей ДНК с соответствующим участком хромосомы реципиента зависит от степени гомологичности ДНК донора и реципиента. Чем выше гомологичность, тем эффективнее спаривание, что определяет конечный результат трансформации, т.е. количество формирующихся рекомбинантов (трансформантов). Отсюда ясно, почему межвидовая трансформация происходит гораздо реже, чем внутривидовая. жүктеу/скачать 265,13 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|