часть растения составляют стебли. Результаты анализа приведены в табл. 2,3.
Таблица 2.
Количественное соотношение органов растения
о
ргаН
растеНия
сурепки
оБыкНоВеННой
(
В
%
от
массы
растеНия
)
ц
Веты
л
истья
с
теБли
к
орНи
9 ± 0,5
19 ± 0,5
59 ± 0,5
13 ± 0,5
99
2012, №4(72) Астана медициналық журналы
ВОПРОСЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ
Таблица 3.
Данные товароведческого анализа сурепки
с
ырье
п
римеси
,
утратиВ
.
окраску
, %
п
остороННие
примеси
, %
м
иНеральНые
примеси
, %
о
ргаНич
.
примеси
,
%
с
тепеНь
измельче
Ния
сырья
Н
адземНая
часть
сурепки
оБыкНоВеННой
0, 43
0,19
0, 15
0,08
2
мм
При определении доброкачественности
сырья дербенника иволистного, установлено,
что показатели соответствуют нормам. Влаж-
ность надземной части растения-8,103%,
в цветах-7,108%, листьях-9,681%, сте-
блях-8,872%. Норма влажности для данного
вида не должна превышать11,03% [3]. Коли-
чество экстрактивных веществ при использо-
вании растворителя 70% этанола составляет
28, 296±0,024%. Зольность сырья наблюдает-
ся наибольшая в цветах равная 13,42% , наи-
меньшая в стеблях-12,89%, общая зольность
наземной части сырья составляет 12,73%.
Содержание золы, нерастворимой в хлорово-
дородной кислоте в пересчете на абсолютно
сухое сырье в в листьях - 4,855% цветах -
4,981%, в стеблях - 4,855%, в наземной части
растения - 4,037%. Ситовой анализ, произве-
ден методом фракционирования [3], с даль-
нейшим исследованием зависимости степени
экстракции от размеров сырья. При размере
сырья равной 1 мм, степень экстракции рав-
на - 24,225%, при 2 мм-28,306%, при 3 мм
- 21,708%. Из полученных данных можно
сделать вывод, что для проведения анализа
данного сырья необходимо его измельчение
до размера 2 мм. Определение соотношения
частей сырья проводилось весовым методом
[3]. В результате анализа определено следу-
ющее количественное соотношение органов
растения: цветы-12,104%, стебли-37,876%,
листья- 32,321%, корень-18,003%.
Качественное определение БАВ.
При проведении качественного анализа
БАВ растения использовались общепринятые
в фитохимическом анализе методы: специфи-
ческие качественные реакции, избирательная
жидкостная экстракция, плоскостная хрома-
тография (бумажная, ТСХ) с использованием
специфичных проявителей.
Для качественного определения флаво-
ноидов выбраны две наиболее характерные
реакции: это реакция с хлоридом железа (III)
и цианидиновая проба [4,5]. В сурепке обна-
ружены агликон флавонола – кверцетин и его
биозид – рутин.
Качественное обнаружение аминокислот
проводили в водных извлечениях с помощью
нингидриновой пробы, большинство амино-
кислот реагируют с нингидрином и имеет
окраску от светло-розового до фиолетового
в зависимости от α- аминокислоты. По хро-
матографическому поведению и специфиче-
ской реакции с нингидрином установлено,
что надземная часть растения дербенника
иволистного содержит 5 аминокислот и они
идентифицированы с достоверными образ-
цами как треонин, аспарагиновая кислота,
триптофан, валин, лейцин.
Результаты хроматографического исследо-
вания сурепки обыкновенной на аминокис-
лоты показали, что все органы растения со-
держат 4 аминокислоты, идентифицирован-
ные с достоверными образцами по хромато-
графическому поведению и специфичной ре-
акции как α-пролин , аспарагиновую кислоту,
α-метионин, лейцин. Причем, α-метионин и
лейцин являются незаменимыми аминокис-
лотами.
Количественное определение БАВ расте-
ний
Химический анализ надземной части
вида проводили с помощью общепринятых
методов анализа: метод избирательной жид-
костной экстракции, хроматография на бума-
ге и в тонком слое сорбента, ГЖХ, атомно-
адсорбционной спектроскопии, спектрофото-
метрии, титри-метрии, перманганатометрии,
масс-спектрометрии (табл. 4, 5-10).
Таблица 4.
содержание бАВ в сурепке обыкновенной
БаВ
к
оличестВеННое
содержаНие
БаВ
В
сурепке
оБыкНоВеННой
(%)
л
истья
ц
Веты
с
теБли
ф
лаВоНоиды
0,7
2,25
-
д
уБильНые
ВещестВа
2,03
2,06
0,083
о
ргаНические
кислоты
2,59
3,159
0,58
у
глеВоды
3,6
1,01
0,357
100
2012, №4(72) Астана медициналық журналы
ТӘЖІРИБЕЛІК МЕДИЦИНА МӘСЕЛЕЛЕРІ
Таблица 5. Содержание БАВ в надземной части дербенника иволистного
№ г
руппа
Биологически
актиВНых
ВещестВ
с
одержаНие
,%
э
кстрактиВНые
ВещестВа
28,293+0,03
•
ф
лаВоНоиды
0,669±0,027
•
о
Бщие
оргаНические
кислоты
8,070±0,032
•
д
уБильНые
ВещестВа
14,110±0,051
•
у
глеВоды
(
моНосахариды
)
0,328±0,027
•
а
скорБиНоВая
кислота
0,315±0,022
•
ж
ирНые
кислоты
0,942
•
а
миНокислоты
2,225
•
м
икроэлемеНты
46
элемеНтоВ
0,1053
Аминокислотный состава надземной ча-
сти дербенника
Можно легко определять отдельные ами-
нокислоты, так как благодаря высокой интен-
сивности молекулярных пиков из-за малого
фрагментирования и относительно слабого
межмолекулярного взаимодействия полу-
чают спектры высокого разрешения. Данное
исследование показало, что общее количе-
ство аминокислот в дербеннике иволистном,
в перерасчете на сухое сырье составляет
- 2,22%. Аминокислотный состав растения
представлен пятью аминокислотами, три из
которых (треонин, лейцин, валин) являются
незаменимыми.
Таблица 6. Аминокислотный состав дербенника иволистного
№
ф
ормула
Н
азВаНие
кислоты
%
содержаНие
Гидроксиаминокислоты-0,527%
•
CH
3
ch(oh)ch(nh
2
)cooh
т
реоНиН
0,527
Моноаминомонокарбоновые кислоты -0,957%
•
(CH
3
)
2
CHCH
2
CH(nH
2
)cooh
л
ейциН
0,704
•
(CH
3
)
2
CHCH(nH
2
)cooh
В
алиН
0,253
Моноаминодикарбоновые кислоты 0,060
•
hoocch
2
CH(nH
2
)cooh
а
спарагиНоВая
кислота
0,060
Гетероциклические аминокислоты-0,681
•
т
риптофаН
0,681
Анализ жирнокислотного состава сырья
дербенника иволистного был выполнен ме-
тодом ГЖХ с предварительным выделением
жирной составляющей растения согласно
ГОСТ 30418-96. Идентификация компонен-
тов высших предельных и непредельных
карбоновых кислот проведена по стандарт-
ным растворам метиловых эфиров высших
предельных и непредельных карбоновых
кислот по относительным временам удержи-
вания. Количественное определение состава
анализируемой смеси осуществлено методом
нормализации по площадям пиков. При этом
установлено, что сумма жирных кислот, в
перерасчете на сухое сырье, составляет 0,
942% .
Таблица 7. Содержание жирных кислот в дербеннике иволистном
№
Кислота
V отн.
•
Тетрадекановая(миристиновая)
0,3
•
Пентодекановая
0,4
•
Гексадекановая(пальмитиновая)
0,5
•
Гексадеценовая (пальмитинолеиновая)
0,6
•
Гептодекановая (маргариновая)
0,7
•
Гептодеценовая (маргаринолеиновая)
0,8
•
Октадекановая (стеариновая)
1
•
Октадеценовая (олеиновая)
1,1
•
Октадекадиеновая (линолевая)
1,3
•
Октадекатриеновая (линоленовая)
1,7
•
Эйкозановая (арахиновая)
1,9
•
Эйкозеновая (гондоиновая)
2,1
•
Эйкозадиеновая
2,5
•
Докозановая (бегеновая)
3,6
•
Докозеновая (эруковая)
3,9
•
Докозадиеновая
4,8
•
Тетрокозановая (лигноцериновая)
7,2
101
2012, №4(72) Астана медициналық журналы
ВОПРОСЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ
Определение суммы дубильных соеди-
нений проведено с использованием двух
методов: метод перманганатометрического
титрования является официальным мето-
дом, принятым Фармакопеей, спектрофото-
метрический метод определения, который
дает более точный результат, так как реакция
взаимодействия с молибдатом аммония спец-
ифична для данной группы БАВ. Для опре-
деления концентрации дубильных веществ в
сырье строим калибровочную кривую, в ка-
честве эталона использован раствор танина.
В результате исследования установлено, что
количество дубильных веществ в дербенни-
ке иволистном - 14,110±0,051%. В результа-
те перманганатометрического определения
установлено, что сумма дубильных веществ
надземной части дербенника иволистного со-
ставляет 17, 923% [3].
Таблица 7. Д
анные спектрофотометрического определения дубильных веществ в сурепке
обыкновенной
о
ргаН
растеНия
м
асса
НаВески
,
г
о
птическая
плотНость
с
о д е р ж а Н и е
дуБильНых
ВещестВ
, %
л
истья
1,0312
0,145
2,03
с
теБли
1,0570
0,005
0,083
ц
Веты
1,0312
0,156
2,06
Количественное определение флавонои-
дов проводилось методом спектрофотоме-
трии в пересчете на кверцетин, где исполь-
зуется их качество при реакции с хлористым
алюминием окрашиваться в желтый цвет или
давать желто-зеленую флюоресценцию. В
дербеннике содержится 0,669±0,027% флаво-
ноидов.
Таблица 8. Данные содержания флавоноидов в сурепке
о
ргаН
растеНия
м
асса
НаВески
,
г
о
птическая
плотНость
с
о д е р ж а Н и е
флаВоНоидоВ
, %
л
истья
1,0040
0,036
0,70
ц
Веты
1,0400
0,120
2,25
Содержание аскорбиновой кислоты было
определено методом йодометрического ти-
трования в присутствии индикатора – крах-
мала [4]. Содержание аскорбиновой кислоты
в дербеннике составляет 0,315±0,022%.
Количественное определение свободных
органических кислот методом титриметрии.
Расчет свободных органических кислот про-
изведен в пересчете на яблочную кислоту [3].
Количество свободных органических кислот
в дербеннике составляет 8,070±0,032%.
Таблица 9. Содержание свободных органических кислот в сурепке
о
ргаН
растеНия
м
асса
НаВески
,
г
V
n
A
oh
,
мл
с
одержаНие
оргаНических
кислот
,
%
л
истья
5,0540
1,7
2,59
с
теБли
5,0043
0,4
0,58
ц
Веты
5,0600
2,1
3,159
Определение содержания углеводов про-
водилось фенол-сернокислотным методом в
пересчете на глюкозу. В основе метода лежит
реакция взаимодействия фенольного гидрок-
сила с спиртовым в первом положении угле-
вода в кислой среде с образованием простого
эфира. Содержание углеводов в дербеннике в
количестве 0,328±0,027% в пересчете на су-
хое сырье.
Таблица 10. Результаты определения углеводов в сурепке
о
ргаН
растеНия
м
асса
НаВески
,
г
о
птическая
плотНость
с
одержаНие
углеВодоВ
,
%
л
истья
1,0077
0,230
3,60
с
теБли
1,0160
0,024
0,357
ц
Веты
1,0224
0,068
1,01
Таким образом,
•Впервые для сурепки обыкновенной и
дербенника иволистного получены показа-
тели доброкачественности сырья, проведен
товароведческий анализ, получены числовые
показатели;
•Впервые определен качественный состав
основных групп БАВ, установлено их коли-
чественное содержание в сурепке обыкно-
102
2012, №4(72) Астана медициналық журналы
ТӘЖІРИБЕЛІК МЕДИЦИНА МӘСЕЛЕЛЕРІ
венном и в дербеннике иволистном;
•Установлено наличие дубильных ве-
ществ, флавоноидов, углеводов, аминокис-
лот, жирных кислот, аскорбиновой кислоты в
дербеннике иволистном;
• Качественным анализом на основе спец-
ифических реакций биологически активных
веществ было определено, что все части рас-
тения сурепки обыкновенной содержат ор-
ганические кислоты, углеводы, дубильные
вещества; листья и цветы содержат флавоно-
иды. Определено их количественное содер-
жание в растении.
ЛиТЕРАТУРА
1. Берсон Г.З. Дикорастущие съедобные растения. – Л.: «Гидрометеоиздат», 1991.-117 с.
2. Федорова А.А. Флора Европейской части СССР. Т. 2.- М.,1976.
3. Государственная фармакопея СССР. В.2.ХI изд. - М., 1990.
4. Гринкевич Н.И., Сафронович Л.Н. и др. Химический анализ лекарственных растений.
- М, 1983.- С. 130.
5. Беликов В. В., Толчкова Т.В. Реакция комплексообразования в анализе флавоноидов //
Фенольные соединения и их физиол. свойства.- Алма-Ата, 1973.- С. 168.
© М.Н. Мусин, А.С. Аргынбекова, 2012
в
лияние
радиаЦии
и
фитопрепаратов
на
состоя
-
ние
пол
в
иммунокомпетентных
органах
и
тканях
организма
животных
М.Н. Мусин, А.С. Аргынбекова
РГКП «Государственный медицинский университет». Семей
ЖАНУАРЛАРДЫҢ АРАсЫНДАҒЫ иМУНОКОМпЕТЕНТІ МүШЕЛЕР
МЕН ТІНДЕРДЕГІ ЛАТ ЖАҒДАЙЫНА РАДиАцияНЫҢ ЖӘНЕ
ФиТОпРЕпАРАТТАРДЫҢ ӘсЕР ЕТУІ
М.Н. Мусин, А.С. Аргынбекова
Зертттеудің мақсаты жедел жалпы гамма-сәулеленуден кейінгі жануарлар ағзасындағы
имунокомпетенті мүшелер мен тіндердегі липидтердің асқын тотығу жағдайына салпыншақ
қайың қыртысынан алынған Be және Mit препараттарының әсерін болып табылды.
Тәжірибелік сұрыптау материалы Be және Mit фитопрепараттарының әсерінен сәулеленген
ағзадағы ЛАТ-ң біріншілік және екіншілік өнімдерінің құрамы барлық зерттелетін мүшелер
мен тіндерде төмендегені көрсетілген.
iNflueNce of radiatioN aNd plaNt derived mediciNes oN lipid
peroxidatioN iN immuNe cells of rets
М. Musin, A. Argynbekova
The goal of our investigation was the study of action of Be and Mit drugs derived from Birch free
on lipid peroxidation in immune cells of rets underwent general gamma irradiation. Results of data
showed the decrease of primary and secondary products of lipid peroxidation in all immune cells
of irradiation organisms.
Б
иохимические исследования в радио-
биологии имеют решающее значение.
В настоящее время внимание ученых при-
влекают изменения метаболизма на уровне
ткани, клетки и субклеточных структур. Это
объясняется тем, что исследования на клеточ-
ном уровне позволяют установить наиболее
общие закономерности радиобиологического
эффекта, так как в ответ на действие ионизи-
рующей радиации незамедлительно включа-
ется неспецифическая система адаптации на
клеточном уровне [1].
103
2012, №4(72) Астана медициналық журналы
ВОПРОСЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ
Одной из первичных реакций при воздей-
ствии ионизирующей радиации является раз-
витие свободнорадикальных процессов ПОЛ,
конечными продуктами которых являются
токсичные вещества. По мнению ряда иссле-
дователей [2], образующиеся радиотоксины,
воздействуя на компоненты клеточной мем-
браны, многочисленные ферменты и гене-
тический аппарат клетки, способствуют раз-
витию лучевого поражения, а радиочувстви-
тельность организма и отдельных органов
во многом определяется исходным уровнем
активных продуктов свободнорадикального
окисления [3].
Многокомпетентность противостоящих
ПОЛ систем позволяет успешно применять
все новые вещества, обладающие антиокси-
дантными свойствами в комплексной тера-
пии целого ряда заболеваний. Актуальность
поиска новых возможностей поддержки
антирадикальной и антиперекисной защиты
обусловлена постоянно возрастающими на-
грузками на данную систему, вызываемыми
такими факторами, как нарастающее эколо-
гическое неблагополучие, рост употребления
лекарственных препаратов, воздействие ра-
диации и пр. [4].
Перспективным ре-
шением проблемы повышения неспецифи-
ческой устойчивости организма при воздей-
ствии неблагоприятных факторов внешней
среды может служить применение фарма-
кологических средств растительного проис-
хождения – фитопрепаратов. В Казахстане в
официнальной и народной медицине находят
применение более 150 видов растений, одна-
ко, еще большее количество можно рассма-
тривать в качестве заменителей и викарных
видов к общепризнанным фармакопейным
растениям. Применение их в последние годы
расширяется в связи с дешевизной, комплекс-
ным лечебным действием на организм, малой
токсичностью и возможностью длительного
применения без побочных эффектов [5].
Особый интерес представляют тритерпе-
ноиды – класс, богатый соединениями, со-
четающими доступность с биологической ак-
тивностью. Наиболее перспективным из это-
го ряда является бетулин – тритерпеноид, по-
разительно широко распространенный в при-
роде, выделенный из коры березы повислой
(Betula pendula Roth) [6,7,8]. В данной работе
под лабораторным шифром Ве был использо-
ван тритерпеноид лупанового ряда бетулин
и фитопрепарат Mit, представляющий собой
смесь тритерпеноидов (содержание бетули-
на до 80%) и флавоноидов, выделенных экс-
тракцией коры березы 90% изопропанолом, с
последующим охлаждением и фильтровани-
ем выпавшего осадка.
МАТЕРиАЛЫ и МЕТОДЫ
Выполнены 4 серии опытов на 66 белых
беспородных половозрелых крысах массой
180-200 грамм. 1 серия – интактные живот-
ные (n=15), 2 серия – облученные животные
(n=17), 3 серия–облученные животные + фи-
топрепарат Ве (n=17), 4 серия–облученные
животные + фитопрепарат Mit (n=17). Все
подопытные животные содержались в одно-
типных условиях вивария. Животные 2-ой,
3-ей, 4-ой серий подвергались облучению в
дозе 6 Гр на радиотерапевтической установ-
ке «Агат-РМ», гамма-лучами
60
Co. Исследо-
вания во 2-ой серии животных проводились
через 30 дней после облучения. Животные
3-ей и 4-ой серий опытов через 2 недели
после облучения получали фитопрепарат
Ве из расчета 25 мг/кг и фитопрепарат Mit
в дозе 50 мг/кг per os в течение 14 дней. Из
печени, селезенки, тимуса, надпочечников
и лимфатических узлов тонкого кишечника
облученных и необлученных животных го-
товились гомогенаты, по ним определялись
такие показатели ПОЛ, как диеновые ко-
ньюгаты (ДК), уровень определяли в плазме
крови [9] и малоновый диальдегид (МДА),
определяли путем реакции с тиобарбитуро-
вой кислотой [10]. Показатели определялись
во всех указанных группах, с проведением
соответствующей статистической обработки
цифровых данных по общепринятым мето-
дам вариационной статистики по методике
Е.В.Монцевичюте-Эрингене с вычислением
критериев Стьюдента. Разность показателей
расценивалась как достоверная при Р
≤
0,05.
РЕЗУЛьТАТЫ и ОбсУЖДЕНиЕ
Анализ экспериментального материала
показывает (табл. 1), что через 30 дней после
общего гамма-облучения отмечается досто-
верное повышение содержания ДК в печени
на 175%, селезенке – 138%, лимфатических
узлах тонкого кишечника – 37%, тимусе –
162% (P<0,05), по сравнению с интактными
животными. В надпочечниках при лучевом
поражении отмечается снижение концентра-
ции ДК на 51,7% (Р<0,01), относительно кон-
трольных величин.
104
2012, №4(72) Астана медициналық журналы
ТӘЖІРИБЕЛІК МЕДИЦИНА МӘСЕЛЕЛЕРІ
Таблица 1.
Влияние фитопрепарата Ве и mit на содержание ДК (нмоль/мл) у облученных
животных
о
ргаНы
исследоВаНия
• и
иНтактНые
ж и В о т Н ы е
(
n
=15)
•о
БлучеННые
жиВотНые
(
n
=17)
• о
БлучеННые
жиВотНые
+
фитопрепарат
В
е
(
n
=17)
• о
БлучеННые
жиВотНые
+
фитопрепарат
m
It
(
n
=17)
п
ечеНь
0,36+0,03
0,99+0,06*
0,13+0,003*
0
0,23+0,03
0
*
с
елезеНка
0,21+0,02
0,50+0,03*
0,12+0,03
0*
0,11+0,05
0*
л
имфатические
узлы
тоНкого
кишечНика
0,35+0,03
0,48+0,04*
0,13+0,02*
0
0,15+0,01
0
*
т
имус
0,42+0,04
1,1+0,08*
0,14+0,03
0**
0,13+0,02
0**
Н
адпочечНики
1,2+0,10
0,58+0,04**
0,11+0,02
0**
0,13+0,02
0**
Примечание. * - достоверно к 1 группе P<0,05 , ** - P<0,01;
0
- достоверно ко 2 группе P<0,05 ,
00
- P<0,01
Далее, из табл. 1 видно, что под воздей-
ствием фитопрепарата Ве у облученных жи-
вотных происходит достоверное уменьшение
содержания ДК в печени на 87%, селезенке
– 76%, лимфатических узлах тонкого кишеч-
ника – 73% (P<0,05), тимусе и надпочечниках
на 87,3% и 81%, соответственно (P<0,01), по
сравнению с данными опытной группы. При
введении фитопрепарата Mit облученным
животным также наблюдается снижение ДК
в печени на 76,8%, селезенке – 78%, лимфа-
тических узлах тонкого кишечника – 68,8%
(P<0,05), тимусе и надпочечниках на 88,2% и
77,6%, соответственно (P<0,01), относитель-
но данных опытной группы. При этом пока-
затели в 3-ей и 4-ой сериях ниже показателей
интактной группы.
В табл. 2 представлены результаты влия-
ния фитопрепаратов Ве и Mit на содержание
МДА облученного организма животных.
Таблица 2.
Достарыңызбен бөлісу: |