Конспект лекций по основам промышленной микробиологии, а также контрольные и тестовые зада
жүктеу/скачать 1,69 Mb. Pdf көрінісі
|
Основы промышленной микробиологии
| 4.4.3 Выделение и хранение
Сложные питательные потребности самих молочнокислых бакте- рий создают значительные трудности при их выделении и особенно количественном учете в различных природных и производственных субстратах. К тому же многие представители этой группы бактерий растут очень медленно и «заглушаются» сопутствующими микроорга- низмами. Достаточно сложно и хранение чистых культур, так как они легко теряют свою активность и производственно ценные свойства. 67 Рисунок 11 – Образование молочнокислыми бактериями диацетила из цитрата: 1 – цитрат-лиаза; 2 – оксалоацетатдекарбоксилаза; 3 – неофаракте- ризованный фермент; 4 – пируватдегидрогеназный комплекс; 5 – лактатдегидрогеназа; 6 – диацетилсинтаза; ТПФ-Е – фермент, содержащий тиаминпирофосфат 68 Для выделения молочнокислых бактерий используют среды, обеспечвающие в должной мере их питательные потребности и угне- тающие рост посторонних микроорганизмов. Последнее достигается применением различных веществ, например: азида натрия, ацетата таллия, сорбиновой и уксусной кислоты, этилового спирта, а также снижением рН среды. Выделение молочнокислых бактерий (особенно, когда они превалирующие в субстрате), учет и культивирование их успешно осуществляют, например, на среде МРС следующего состава (%): дрожжевой экстракт – 0,5; мясной экстракт – 1,0; пептон – 1,0; глюкоза – 2,0; лимоннокислый аммоний – 0,2; уксуснокислый натрий – 0,5; твин-80 – 0,1; К 2 НРО 4 – 0,2; MgSO 4 7H 2 O – 0,02; MnSO 4 4H 2 O – 0,05; рН 6,2…6,6. Готовят среду МРС на гидролизованном молоке, разведенном в два раза дистиллированной водой. Применяют также среду МРС-1: на 1 л среды (в отличие от среды МРС) добавляют 0,2 г цистеина, 50 мл дрожжевого автолизата и 100 мл печеночного экстракта. Молочнокислые бактерии можно выделять также на среде друго- го состава (%): растительный (капустный, морковный) отвар – 10; дрожжевой автолизат – 1,0; пептон – 1,0; глюкоза – 2,0; этиловый спирт – 8,0…16,0 (подавляет рост посторонних им микроорганизмов). Спирт следует вносить в засеянную испытуемым субстратом жидкую среду через 18…24 ч культивирования. Из жидкой среды производят высев на агаризованную среду того же состава, но без спирта, в кото- рую добавляют 4,0 % измельченного мела. Молочнокислые бактерии, при росте на данной среде, образуют вокруг колоний зоны просветле- ния, обусловленные превращением нерастворимого углекислого каль- ция в растворимый лактат кальция. Известны и многие другие среды. Выделение некоторых молочнокислых бактерий следует прово- дить в атмосфере, содержащей 90,0 % Н 2 и 10,0 % СО 2 . Для длительного хранения молочнокислые бактерии заморажи- вают при температуре жидкого азота; при посеве уколом в столбик, например, полужидкой среды МРС-1, содержащей до 0,25 % глюкозы или посева в другие среды (молоко с мелом и др.), а также на пита- тельных средах того или иного состава, к которым добавляют 8,0…12,0 % этилового спирта. |