8.1.4. Митоген- активируемые протеинкиназы
МАРК представляют собой серин/треониновые протеин-
киназы и включают три небольших семейства — p38, JNK/SAPK
(c-Jun N-terminal kinase/Stress activated protein kinase) и ERK
(Exracellular signal- regulated kinase). Каждый из этих фермен-
тов существует в нескольких изоформах: p38-α,-β,-γ,-δ, JNK1–
3 и ERK1–8. Практически во всех случаях активация протеин-
киназ семейства ERK связана с клеточным выживанием и сти-
муляцией пролиферации, а активация протеинкиназ семейств
р38 и JNK — с индукцией апоптоза (Schaeffer et al., 1999; Dhillon
et al., 2007; Kim et al., 2010).
Основным элементом всех MAPK-путей принято считать
трехкомпонентные протеинкиназные каскады, которые являют-
ся эволюционно консервативными у всех эукариот — от дрожжей
до человека (Kyriakis, Avruch, 2012; Peti, Page, 2013). Внутри этого
корового компонента сигнальных путей протеинкиназы MAPK
фосфорилируются и активируются протеинкиназами MAPKK,
которые имеют двой ную специфичность и могут фосфорилиро-
вать как тирозиновые, так и треониновые остатки. Альтернатив-
ное обозначение таких киназ — MEK-киназа. А MAPKK (MEK),
в свою очередь, аутофосфорилируются и активируются серин-
треониновыми протеинкиназами MAPKKK. Таким образом, си-
стема работает в направлении MAPKKK → MAPKK → MAPK. На-
пример, Raf→MEK→ERK1/2 или MEKK→MKK4/7→JNK1 (рис. 46).
В конечном счете фосфорилируются ядерные транскрипцион-
ные факторы, отвечающие за активность генов митоза, так на-
зываемых онкогенов (с-fos, c-mys, ATF2, p38 и др.), что приводит
к бласттрансформации, то есть началу серии митотических деле-
ний (Davis et al., 2000; Dhillon et al., 2007; Kim et al., 2010).
Одним из представителей MAPKKK является белок Raf. Это
серин/треониновая киназа с массой 74 кДа, которая активиру-
ется с помощью Ras по еще недостаточно хорошо изученному
101
механизму. Состоит из двух доменов, из которых С-терминаль-
ный является каталитическим. Известны три изоформы Raf — A,
B и C. Каждая изоформа различается по активности. Raf активи-
рует одну из цитоплазматических MEK-киназ (Dhillon et al., 2007).
Важная особенность большинства известных MAP-киназ: ак-
тивация этих ферментов кратковременна. Это связано с тем, что
при активации MAPK стимулируется транскрипция MAPK-фос-
фатаз двой ной специфичности (MKP). Например, MKP2/4 де-
фосфорилирует ERK1/2, но также может деактивировать и дру-
гие MAPK. В клетке есть и субстрат специфичные фосфатазы —
MKP3 и MKP-X действуют только на ERK-киназу (Owens, Keyse,
2007).
8.1.5. События, реализуемые в Ras/МAРК-сигнальном пути
Тирозинкиназный рецептор находится в мономерной фор-
ме, а белок Ras в комплексе с ГДФ закреплен на мембране клет-
ки с помощью фарнезильного якоря. Связывание ЭФР вызывает
димеризацию рецептора и аутофосфорилирование его цитоплаз-
матической части. В результате образуются фосфотирозины —
сайты связывания адаптерных белков. При помощи SH2-домена
адаптерный белок Grb2 взаимодействует с фосфотирозином ре-
цептора, а при помощи SH3-доменов с белком SOS (GEF), который
представляет собой гуанин- нуклеотид обменивающий фактор.
Белок SOS активирует Ras-белок, инициируя обмен ГДФ на ГТФ,
Рис. 46. Протеинкиназный каскад (адаптация Soares- Silva et al., 2016)
102
что в конечном счете приводит к запуску трехкомпонентного ки-
назного каскада: Ras-белок активирует Raf-киназу (MAPKKK),
Raf-киназа активирует MEK-киназу (MAPKK), а MEK-киназа
активирует ERK-киназу (MAPK), которая фосфорилирует цито-
плазматические или ядерные белки (рис. 47).
8.1.6. Ядерный фактор транскрипции NF-kB
В большом числе случаев конечным эффектором МАР-ки-
назных сигнальных каскадов, индуцированных ростовыми фак-
торами (и цитокинами), являются белковые транскрипционные
факторы, в частности, ядерный фактор транскрипции NF-kB.
В настоящее время данный сигнальный белок считается
одной из ключевых молекулярных мишеней в противоопухо-
левой таргетной терапии, поскольку с его участием, прямо или
опосредованно, модулируется экспрессия около двухсот генов,
Рис. 47. Ras/MAPK-сигнальная система
103
контролирующих клеточное деление, апоптоз, неоангиогенез
и инвазию — основополагающие процессы гиперплазии и кан-
церогенеза. NF-κB необходим для нормальной дифференцировки
некоторых клеток крови и формирования структуры вторичных
лимфоидных органов. Он играет важную роль в реализации про-
воспалительных, аутоиммунных и некоторых других внутрикле-
точных функций.
Ядерный фактор NF-kB представляет собой комплекс белков,
обладающих транскрипционной активностью. Он обнаружен
во всех клетках млекопитающих и в норме играет важную роль
в созревании, дифференцировке и адаптации клеток к новым фи-
зиологическим условиям. Его повышенная активность регистри-
руется при старении, хронических воспалительных, аутоиммун-
ных и онкологических заболеваниях.
Обеспечивающий выживание клетки в экстремальных ус-
ловиях фактор NF-kB не активен в покоящихся клетках. Он
активируется после воздействия на клетку ростовых факторов,
эндотоксинов (бактериальных липополисахаридов), внешних
канцерогенов, опухолевых промоторов (форболовых эфиров),
провоспалительных цитокинов (ИЛ-1, ИЛ-17, ИЛ-18, ТНФα),
вирусной инфекции, УФ-излучения, при активации В- или
Т-лимфоцитов, оксидативном стрессе, а также влиянии других
физиологических и нефизиологических стимулов. В результате
активации фактора NF-kB происходит спонтанная стимуляция
транскрипции широкого спектра NF-kB-зависимых генов (про-
воспалительных цитокинов, хемокинов, молекул адгезии и дру-
гих биологически активных веществ), обеспечивающих клеточ-
ную выживаемость.
В состав фактора NF-kB могут входить пять самостоятель-
ных белков (субъединиц): p50 (NF-kB1), p52 (NF-kB2), p65 (relA),
c- Rel и RelB, каждый из которых имеет определенную степень го-
мологии с известным вирусным онкобелком v- Rel (Lawrence, 2009;
Hoesel, Schmid, 2013).
В настоящее время хорошо изучен процесс активации фак-
тора под действием внешних стимулов. В покоящихся клетках
NF-kB преимущественно находится в цитоплазме в виде неак-
тивных тримерных комплексов, состоящих из «классического»
гетеродимера р65/p50 (или из гетеродимеров RelB/p50 и RelB/p65)
и ингибиторного белка I-kB (или одного из его аналогов: I-kBa,
I-kBb, I-kBe, I-kBg, Bcl-3).
104
Для активации фактора необходима диссоциация I-kB
из олигомерного комплекса. После фосфорилирования специфи-
ческими киназами, то есть I-kB-киназами (IKK), ингибиторный
белок I-kB подвергается деградации протеазами цитоплазмы.
Диссоциация I-kB из неактивного комплекса способствует акти-
вации двух оставшихся NF-kB-субъединиц, которые транслоци-
руются в ядро и связываются со специфическими NF-kB-сайтами
в промоторной области NF-kB-индуцибельных генов. При этом
разные димеры обладают разными трансактивационными свой-
ствами и взаимодействуют с разными регуляторными участками
ДНК, что позволяет осуществлять дифференцированный кон-
троль генной транскрипции (рис. 48).
Недавно было доказано, что для оптимальной активации
фактора NF-kB, а также последующей диссоциации и убиквитин-
зависимой деградации ингибиторного белка I-kB необходимо
фосфорилирование (по остатку Ser-536) еще и субъединицы
р65 самого фактора.
В трансформированных клетках в итоге всех этих событий
инициируются клеточные ответы, приводящие к прогрессии
опухолевых процессов: пролиферации, адгезии и инвазии, а так-
же к включению антиапоптотических механизмов и индукции
Рис. 48. Процесс активации фактора NF-kB
под действием внешних стимулов
105
опухолевого неоангиогенеза. Под действием фактора NF-kB тран-
сактивируется экспрессия ключевых сигнальных белков, опосре-
дующих малигнизацию: с-myc, циклина D1, протеолитических
ферментов ММР-2 и uPA, ангиогенных факторов VEGF, ИЛ-8 и пр.
Известно, что конститутивная активация фактора есть не что
иное, как отражение повышенной активности киназ, фосфорили-
рующих его ингибиторную субъединицу I-kB (IKK-киназ).
В настоящее время известны три основных группы синтети-
ческих NF-kB-ингибиторов, направленно блокирующих актив-
ность фактора на разных этапах опосредуемых им пролифера-
тивных сигналов. Это: 1) нестероидные противовоспалительные
препараты (наиболее известный из которых — обычный аспи-
рин, или ацетилсалициловая кислота); 2) производные гормонов
глюкокортикоидов (дексаметазон, преднизон) и 3) применяемые
в трансплантологии иммуносупрессоры (FK 506, циклоспорин).
Однако ни один из этих препаратов не является идеальным, по-
скольку, во-первых, все они в той или иной степени ослабляют
нормальный иммунный и воспалительный ответ, а во-вторых,
обладают различной степени тяжести побочными эффектами
(Lawrence, 2009; Hoesel, Schmid 2013).
Достарыңызбен бөлісу: |