Курс лекций для студентов специальности -48 02 01 «Биотехнология» Минск 2014 034)
Приготовление посевного материала для поверхностного
жүктеу/скачать 1,87 Mb. Pdf көрінісі
|
| Приготовление посевного материала для поверхностного
культивирования микроорганизмов. Поверхностный способ при- меняют в основном при культивировании мицелиальных грибов. В этом случае посевной материал может быть приготовлен в виде: 1) культуры, выращенной на твердой питательной среде; 2) спорового материала; 3) мицелиальной массы продуцента, выращенной на жидкой пи- тательной среде глубинным способом. Посевную культуру на твердой питательной среде готовят выра- щиванием микроорганизмов в возрастающем количестве в 3–4 этапа. Состав питательной среды определяется свойствами микроорганизма- продуцента. Чаще всего для этой цели используют увлажненные пшеничные отруби. Влажность среды после стерилизации должна со- ставлять в зависимости от вида продуцента 35–65%. Для рыхлости к отрубям иногда добавляют древесные опилки, солодовые ростки, свекловичный жом. На первом этапе приготовления посевного материала исходную культуру продуцента пересевают в пробирку с 1,0–1,5 г стерильных отрубей и выращивают при оптимальной температуре до обильного спорообразования. На втором этапе продуцент культивируют в тех же условиях и на той же среде в колбах емкостью 0,75–1,0 дм 3 , содержащих 40–100 г влажной среды (из одной пробирки засевают среду в 3–4 колбах). На третьем этапе (дополнительный этап, при малом спорообразо- вании у продуцента) культивирование осуществляют в колбах с 300 г влажных отрубей до наступления обильного спорообразования. На четвертом этапе полученный посевной материал используют для засева посевных кювет. Кюветы прямоугольной формы размером 36 600×400 мм и высотой борта 20–30 мм выполнены из сплошного ли- ста оцинкованного железа, снабжены крышками с одним или двумя отверстиями, которые закрываются ватно-марлевыми подушками. Вместимость посевных кювет 400–500 г воздушно-сухих отрубей. Пи- тательную среду стерилизуют в автоклаве в биксах по 2 кг при давле- нии 0,15 МПа в течение 1 ч, а посевные кюветы – в стерилизационных шкафах при температуре 120–130°С в течение 2,0–2,5 ч. Содержимым одной колбы засевают 20 посевных кювет. Посев- ной материал смешивают с питательной средой в отдельной емкости с соблюдением всех правил асептики и раскладывают в кюветы слоем толщиной 0,8–1,2 см. Между кюветой и крышкой укладывают слой непроклеенной бумаги для предотвращения возможной конденсации влаги на крышке и создания зон излишнего увлажнения растущей культуры. Кюветы со средой помещают на стеллажи в растильные ка- меры, в которых поступающим через кондиционер воздухом поддер- живается определенная влажность и температура. Камеры заполняют кюветами, исходя из удельной нагрузки по культуре 1–2 кг засеянной среды (по сухой массе) на 1 м 3 объема камеры. При этом обмен возду- ха в камере должен быть равен 2–3 объемам камеры за 1 ч. Готовый посевной материал снимают с кювет и во влажном со- стоянии помещают в стерильные пакеты, которые затем хранятся при температуре 3–4°С. Длительность хранения посевного материала не должна превышать 5–6 суток (влажная культура подвержена лизису, и активность ее снижается). При необходимости более длительного хранения посевной материал подсушивают до влажности 10–12% в растильной камере воздухом при температуре 28–30°С, предвари- тельно сняв крышки с кювет. Приготовленный посевной материал представляет собой спороносящую культуру продуцента и должен со- держать не менее 0,7 млрд спор в 1 г. Для получения засевной суспен- зии посевной материал смешивают со стерильной водой в специаль- ной емкости. Суспензия используется для засева среды в производ- ственных условиях. Споровой материал отличается от спороносящей культуры незна- чительным содержанием самой питательной среды и состоит главным образом из спор продуцента при небольшом содержании мицелия. Споровой материал содержит 7–10 млрд спор в 1 г. Для получения спорового посевного материала поверхностную культуру подсушива- ют до влажности 9–10% и подают в вибросепаратор, из которого воз- душным потоком (вакуум-насосом) конидии отделяются от среды и собираются в приемник. Споровой материал расфасовывают в поли- 37 этиленовые пакеты в боксе-манипуляторе. Полученный таким обра- зом конидиальный материал может храниться без значительных изме- нений при температуре 8–24 С до 1,5 лет. За год хранения конидии теряют всхожесть в среднем на 8%. Споры (конидии) обладают свойством гидрофобности – плохо смачиваются водой. Это приводит к неравномерности засева среды и, следовательно, к неодинаковой скорости роста культуры. Однород- ную суспензию конидий можно получить добавлением в воду на каждый грамм спорового материала 25–50 см 3 ПАВ (алкилбензол- сульфата). При этом смачиваемость спор сильно возрастает при неизменной всхожести. Применение спорового материала облегчает технологический процесс, позволяет более полно механизировать его. Однако получе- ние спорового посевного материала приводит к сильному загрязнению воздуха конидиями. Несмотря на наличие аспирационных устройств, насыщенность воздуха конидиями может достигать 3·10 2 –1·10 4 на 1 м 3 , что недопустимо в санитарно-гигиеническом отношении. Это приводит к необходимости применять специальную одежду и индиви- дуальные средства защиты. Чтобы исключить возможность проникно- вения посторонней микробиоты, в помещениях цеха чистой культуры поддерживается подпор воздуха (р изб = 0,01–0,02 МПа). Наиболее безопасным является получение посевного материала глубинным культивированием в виде мицелиальной массы. Отличие этого способа от рассмотренных состоит в том, что культура, выра- щенная в колбах на отрубях, поступает для засева жидкой питатель- ной среды в лабораторных ферментаторах объемом до 40 дм 3 . Про- должительность культивирования обычно составляет 24–30 ч. Моло- дая, активно растущая мицелиальная масса служит посевным матери- алом для засева производственной среды. Такой способ позволяет в 2,5–3,0 раза сократить длительность приготовления посевного мате- рала, в 4–5 раз уменьшить площадь отделения чистой культуры, улучшить условия труда, снизить спорообразование в готовой произ- водственной культуре. жүктеу/скачать 1,87 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|