Удаление клеточных протеаз, которые способны разрушить
целевые
ферменты,
осуществляют
обработкой
ингибиторами-
комплексонами (ЭДТА, о-фенантролином, оксихинолином), солями ртути
или серебра. Также протеазы удаляют при помощи аффинной
хроматографии. Если фермент термостабилен, а протеазы термолабильны,
то последние удаляют нагреванием.
Удаление нуклеиновых кислот. Для осаждения нуклеиновых кислот
в виде комплексов используют бромистый цетилтриметиламмоний,
стрептомицинсульфат, протаминосульфат, полиэтиленимин. Полнота
осаждения зависит от рН, ионной силы, концентрации осадителя и белка.
Также нуклеиновые кислоты удаляют путем их гидролиза нуклеазами
(панкреатические ДНК-аза и РНК-аза).
Широко используют метод фракционирования белков нейтральными солями или органическими растворителями. Соль (аммония сульфат),
растворяясь, связывает воду, в результате изменяется степень гидратации
молекул белка, что приводит к их агрегации и образованию осадка.
Аммония сульфат стабилизирует многие ферменты.
При смешивании с водой органического растворителя (этанола,
ацетона) изменяется ее диэлектрическая константа и происходит замена
молекул воды на молекулы растворителя, в результате ускоряется
образование нерастворимых белковых агрегатов. Эти операции проводят
при температуре не выше – 10ºС, используя охлажденные сухим льдом
