Кенжебаева Сəуле Сағындыққызы биотехнологиядағЫ Қазіргі əдістер
жүктеу/скачать 5,04 Mb. Pdf көрінісі
|
- Бұл бет үшін навигация:
- 3.11. Нуклеин қышқылдарының сутектік байланыстары жəне оның құрылымын талдау
| 3.10. Нуклеин қышқылдарының
құрамындағы санын анықтау Нуклеин қышқылының құрамын ДНҚ ертіндісінің ультракүлгін оңтайлы тығыздығы 260 нм (Д 260 ) болғанда, спектрофотометрия əдісі арқылы анықтайды. Пиримидиндік жəне пуриндік негіздерде 255 жəне 260 нм оптикалық тығыздығы максималды сіңіру (шың) болады, бұны НҚ құрамындағы санын анықтауға болады. Белоктардың оптикалық тығыздығының шыңы 280 нм-ге сəйкес келеді, бұл тирозиннің жəне триптофанның қатысуымен жүреді. Егер ДНҚ ертіндісінің оптикалық тығыздығының қатынасы 260 нм жəне 280 нм өлшесе, НҚ дəрі- дəрмектерде 1.5 есе көбейе бастаса, онда НҚ дəрі-дəрмегі белоктардан жақсы тазаланған деп есептеледі. Егер бұндай қатынас алынбаса, онда белоктардан тазалаудың фенолды/хлороформ экстракциясын қолдану арқылы тазалауды ары қарай жалғастыру керек. Алынған НҚ дəрі-дəрмек құрамындағы нуклеин қышқылдарының санының мөлшерін анықтау үшін, сумен 50-100-есе сұйылту қажет. НҚ концентрациясы келесі формулалармен есептеледі: ДНҚ = Д 260нм х 50 х сұйылту факторы, мг/мл РНҚ = Д 260нм х 50 х сұйылту факторы, мг/мл Олигонуклеотидтар = Д 260нм х 30 х сұйылту факторы, мг/мл 124 3.11. Нуклеин қышқылдарының сутектік байланыстары жəне оның құрылымын талдау In vivo- жəне vitro жағдайдағы нуклеин қышқылдарының сипаты көбіне табиғи сутектік байланыстың мықтылығына байланысты бо- лып келеді. ДНҚ-ны азырақ қыздыру, мысалы, қос спираль арқылы бөлген кезде оралады жəне денатурацияланады. Қоспаны аздап суы- та бастағанда, ДНҚ молекуласының комплементарлы бір тізбегі қайта қос тізбекті спираль түріне келіп, реассоциацияланады. Молекулалық құрылымның спектрофотометрдегі ДНҚ ерітіндісінің оптикалық тығыздығы 260 нм (Д 260 ) бұлай өзгеруін бақылауға болады. ДНК-ның денатурациясы мен оралымы кезінде оның оптикалық тығыздығы күшейеді. Екі əртүрлі ДНК-ның жүзу кескіні 3.1-суретте көрсетілген. Əрбір қисықтың ортасындағы нүкте ДНК-ның жүзу температу- расымен сəйкестендіріледі (Тт). Бұл нүктеде барлық молекуланың 50% реассоцияленген, ал қалған жартысы жоқ. Молекула құрамында Г ≡ С жұбы көбірек кездесетін жағдайда, А ≡ Т кездесетін молекула құрамымен салыстырғанда жүзу температурасы жоғары, себебі оларда қосымша сутегі байланыстары бар. 3.1-сурет. ДНҚ ерітіндісінің оптикалық тығыздығы температура өсіміне байланысты (гиперхромный эффект). Қисық Г ≡ С жұптың мөлшері əртүрлі ДНК дəрi-дəрмектерына тəн. Балқу температурасы молекулаларда (Т макс ) 83°С-тің, Г ≡ С жұбының мөлшері үлкен (У. Клаг, М. Каммингс, 2007) жүктеу/скачать 5,04 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|