Микрофлора растительного лекарственного сырья
жүктеу/скачать 64,26 Kb.
|
|
Микрофлора растительного лекарственного сырья. Сырье – лекарственные субстанции, лекарственные растения или их части, полупродукты, вспомогательные вещества, используемые в производстве ЛС, за исключением упаковочных и маркировочных материалов. Лекарственное вещество или субстанция – стандартизированное химическое соединение (вещество), обладающее лечебными или профилактическими свойствами, разрешенное к применению и предназначенное для изготовления ЛС. Лекарственные вещества получают химическим синтезом, путем выделения и химической очистки из растительного сырья или с использованием клеток-продуцентов (бактерий, грибов, растений, животных). Лекарственное сырье, используемое в технологическом процессе получения лекарственных препаратов может быть природного (животного, растительного) и синтетического происхождения. Синтетическое сырье менее подвержено микробному воздействию, поскольку только для небольшого числа видов микроорганизмов оно м послужить питательным субстратом. В большей степени микробной контаминации и порче подвержено сырье растительное. К ним относят корни, корневища, кору, цветы, листья, плоды, почки и д. В настоящее время в РФ используют порядка 250 различных видов лекарственных растений для получения на их основе лекарственных препаратов. Для производства активных фармацевтических субстанций (АФС), нужно большое количество наименований исходного сырья самого различного происхождения: химические реагенты органические и неорганические, растворители, катализаторы и т.п. Все это поступает на производства вагонами и цистернами. Для проведения синтеза нужно самое различное оборудование: реакторы, смесители, колонны, центрифуги, сушилки. Всегда есть проблема с растворителями, их регенерацией и утилизацией. А на стадиях выделения готового продукта растворитель должен быть еще и безопасным – для водорастворимых АФС вода не годится. Производители не только АФС, но и поставщики исходных материалов для АФС, постоянно находятся в поиске более совершенных технологий, менее энергоемких и материалоемких, вплоть до того, что в принципе меняется технология производства. Вместо трудоемкого и дорогого химического синтеза аскорбиновой кислоты мы сегодня имеем дешевую продукцию микробиологического синтеза из Китая. Процесс заготовки растительного сырья (сушка, консервирование) оказывает существенное влияние на кол-во м\в в сырье и их активность. Даже при соблюдении норм и правил заготовки лекарственных растений на корнях остаются минимальные кол-ва почвы, содержащей микроорганизмы, на листьях и цветках присутствуют микроорганизмы воздуха. Таким образом, помимо эпифитной и фитопатогенной микрофлоры в ЛРС могут попадать посторонние микроорганизмы. Лекарственное растительное сырье может инфицироваться патогенными микроорганизмами на всех этапах заготовки - сбор, первичная обработка, сушка, измельчение, в процессе придания удобной формы гранул или брикетов, в процессе упаковки, транспортировки и хранения. Состав микроорганизмов зависит от вида лекарственного сырья, его структуры и фармакологических свойств. Преобладают грибы (Mucor, Penicillium, Aspergillus, Saccharomyces, Candida), актиномицеты и спорообразующие виды бактерий (B. subtillis, B. megatherium). На консервированных плодах можно встретить споровые и осмофильные бактерии. При хранении сырья важно соблюдение санитарного режима на фармацевтических производствах и в аптеках. Микробная обсемененность лекарственных препаратов зависит от соблюдения в аптеке санитарно - эпидемического режима, регламентируемого в настоящее время приказом МЗ РФ №309 от 21.10.97 «Об утверждении инструкции по санитарному режиму аптечных организаций (аптек)». В аптеки сырье поступает уже в измельченном виде и поверхность обсеменения увеличивается, поэтому требуется строго соблюдать условия хранения и проводить бактериологический контроль, предусмотренный специальной инструкцией по правилам хранения аптечного лекарственного сырья и соблюдению санитарного режима. Неблагоприятное действие оказывают влажность, пыль, насекомые и другие факторы, повышающие микробное обсеменение и приводящие к порче лекарственного сырья. Порча сырья происходит в первую очередь при повышенной влажности, которая способствует размножению гнилостных микробов, что приводит к изменению фармакологических свойств растений. При хранении повышенная влажность (более 60%) и температура (более 20) способствует дополнительному размножению м\в. Это м привести к порче сырья. В таких условиях резко снижается содержание действующих веществ, например, листья наперстянки под действием микробиоты утрачивают 50% своей активности, листья ландыша 30%. Внешними проявлениями микробной порчи растительного сырья являются изменение цвета и консистенции, загнивание, плесневение всего растения или его частей. При этом резко снижается содержание или полностью исчезают фармакологически активные вещества, использование такого недоброкачественного сырья становится бесполезным или вредным. Легко портятся плоды, ягоды и корневища, богатые углеводистыми соединениями, более устойчивыми являются сухие листья, корни, кора. При использовании контаминированного сырья микробы-загрязнители попадают в готовую лекарственную форму. Чтобы исключить отрицательные последствия попадания м-в загрязнителей с сырьем и вспомогательным материалом, введены требования к микробиологической чистоте этих объектов фармацевтического производства. Определение микрофлоры в лекарственных формах Правила GMP были впервые введены в 60-х годах для производства готовых лекарственных средств (ГЛС). В течение почти 40 лет они распространялись только на ГЛС и не затрагивали производство активных фармацевтических субстанций. Качество и эффективность лекарственного средства непосредственно зависят от качества АФС. Нечистая субстанция или не та субстанция, могут нанести вред больному. Из плохих материалов невозможно получить хороший продукт. Европейский Союз в 2001 г. внес в правила GMP EC (в редакции ГОСТ Р 52249-2004) приложение 18,которое так и называлось «Руководство по производству активных фармацевтических субстанций (АФС). Данная часть стандарта является руководством по применению правил GMP к производству АФС с целью обеспечения гарантии качества и соответствия требованиям к чистоте). Итак, ЕС пользуясь стандартом GMP, контролирует исходное сырье (Herbal substences) по спецификациям. Причем, объем требований, заложенных в спецификации по ГОСТ 52249, намного шире характеризует сырье, поступающее для переработки, чем требования ГФ 12 и СанПиНы РФ. Например, в Германии контролируют в исходном сырье около 480 пестицидов, «тяжелые» (токсичные) металлы, большой список микроорганизмов, контролируют площади для выращивания растительного сырья, в соответствии с требованиями ГОСТ 52249, предупреждающего, что фармакологическая активность и стабильность готового лекарственного средства во многом зависит от способа получения растительного сырья, т.е. от выбора семян, условий выращивания и заготовки сырья. Именно поэтому в спецификацию на растительное сырье введены требования о происхождении сырья, об использовании пестицидов при заготовке сырья, методы определения содержания пестицидов и их допустимые концентрации, а также испытания на содержание токсичных металлов и др. Россия должна гармонизировать свои нормы к растительному сырью с нормами ЕС, потому что потребители РФ имеют право получить эффективное и безопасное растительное средство, также как и европейские потребители! Ведь это одна из главных причин, почему мы гармонизируем требования ЕС и РФ. При исследовании лекарственных форм осуществляют: определение общего микробного числа (микробная обсемененность); определение бактерий группы кишечной палочки; определение дрожжевых и плесневых грибов; определение условно - патогенных и патогенных микроорганизмов. Определение микробной обсемененности растительного лекарственного сырья: В асептических условиях (в стерильной чашке Петри, обоженными ножницами и пинцетом) из листа или верхнего слоя корневища вырезают кусочек площадью 1 см2, который помещают в пробирку с 10 мл стерильного физиологического раствора и взбалтывают в течение 5 мин. Из полученного смыва готовят четыре десятикратных разведения (1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000), для посева в связи с большой обсемененностью растительного сырья используют два последних (1: 1000 и 1: 10000) разведения. В стерильную чашку Петри вносят 1 мл смыва, после чего в нее наливают 15 мл расплавленного и остуженного до 450С МПА, перемешивают и после застывания агара посевы инкубируют при 370С 24 - 48 ч. Производят подсчет выросших колоний на поверхности и в глубине агара. Полученное число колоний следует умножить на степень разведения. Определение общего количества грибов: Определение общего количества грибов проводят на твердой среде Сабуро, на которую засевают 0,5 мл цельного или разведенного 1:10 препарата. Посевы инкубируют при 240С в течение 5 суток, затем подсчитывают число выросших колоний и определяют количество грибов в 1 мл (1 г) препарата. Качественное определение условно - патогенных и патогенных микроорганизмов Определение бактерий семейства Enterobacteriaceae (роды Escherichia, Salmonella, Shigella). Посев лекарственных средств производят на среду Эндо и висмут -сульфитный агар. Идентификацию энтеробактерий осуществляют следующим образом: если в образце обнаружены грамотрицательные неспоровые палочки, дающие отрицательную реакцию на цитохромоксидазу, ферментирующие глюкозу и восстанавливающие нитраты в нитриты, исследуемый препарат содержит бактерии семейства Enterobacteriaceae. Определение патогенных стафилококков. Определение патогенных стафилококков производят посевом на желточно - солевой агар. На этой среде патогенные стафилококки вызывают расщепление лецитина, проявляющееся в образовании вокруг колоний зоны помутнения с радужным венчиком по периферии. Выделенную чистую культуру исследуют на наличие плазмокоагулазы. Выявление Pseudomonas aeruginosa. Осуществляют на среде с глицерином. Синегнойная палочка на этой среде образует зеленоватые флуоресцирующие колонии, выделяющие в среду сине - зеленый пигмент. Выявление протея. Производят посевом на МПА по Шукевичу. Наличие условно - патогенных и патогенных микроорганизмов в лекарственных препаратах недопустимо. В соответствии с требованиями Государственной фармакопеи XII издания приняты следующие критерии оценки микробной обсемененности лекарственного сырья и субстанций (табл. 2) Таблица 2 Микробиологическая чистота субстанций и вспомогательных веществ для производства лекарственных препаратов
жүктеу/скачать 64,26 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|