Астана Медициналық Журналы



Pdf көрінісі
бет16/31
Дата28.01.2017
өлшемі4,34 Mb.
#2884
1   ...   12   13   14   15   16   17   18   19   ...   31

ЦЕЛЬ
Изучение  противовоспалительной  актив-
ности эфирного масла аянии кустарничковой 
на  моделях острой экссудативной  реакции и 
хронического пролиферативного воспаления.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Исследования противовоспалительной эф-
фективности  эфирного  масла  аянии  кустар-
ничковой  проведены  в двух  сериях  экспери-
ментов на 39 белых беспородных половозре-
лых крысах-самцах средней  массой 250–300 
г.  Животных  содержали  в  виварии  на  стан-
дартных условиях.
Острую  экссудативную  реакцию  (пери-
тонит)  вызывали  внутрибрюшинным  введе-
нием  1%-ного  раствора  уксусной  кислоты  в 
объеме 1 мл на 100 г массы тела. Через 3 часа 
животных  забивали,  вскрывали  брюшную 
полость,  собирали  экссудат  и  оценивали  его 
объем [12]. Эфирное масло аянии кустарнич-
ковой в 50% растворе подсолнечного масла в 
дозе 200 мг/кг и диклофенак натрия в дозе 25 
мг/кг  вводили  зондом  в  желудок  за  1  час  до 
уксусной  кислоты.  Контрольные  животные 
получали подсолнечное  масло  в  эквивалент-
ном объеме.
Хроническое  пролиферативное  воспале-
ние  вызывали  имплантацией  под  кожу  в  об-
ласти спины простерилизованного фетрового 
диска  массой  15  мг.  Операцию  выполняли 
под  легким  эфирным  наркозом  в  асептиче-
ских условиях. На 8-ые сутки после операции 
фетровые  диски  с  образовавшейся  вокруг 
них грануляционной тканью извлекали, взве-
шивали и высушивали до постоянной массы 
при  60  °С.  Пролиферативную  реакцию  оце-
нивали  по  разнице  между  массой  высушен-
ной гранулемы и исходной массой фетрового 
диска. Экссудативную реакцию оценивали по 
разнице между массой сырой и высушенной 
гранулемы  [12].  Эфирное  масло  аянии  ку-
старничковой  в  подсолнечном  масле  в  дозе 
100 мг/кг и диклофенак натрия в дозе 10 мг/
кг  вводили  зондом  в  желудок  ежедневно  на 
протяжении всего опыта
Статистическая  обработка  результатов 
проводилась  с  использованием  пакета  про-
грамм «Statistica 6,0». Полученные результа-
ты  представлены  в  виде  «среднее  значение 
±  стандартная  ошибка  среднего  значения». 
Межгрупповые  отличия  оценивали  непара-
метрическим  крите рием  Mann-Whitney  U-
test.  Достоверными  считались  различия  при 
достигнутом уровне значимости p < 0,05 [13].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
На  первом  этапе исследований  антиэкссу-
дативное действие эфирного масла аянии ку-
старничковой в дозе 200 мг/кг оценивали на 
модели перитонита у крыс.
Изучение  влияния  эфирного  масла  аянии 
кустарничковой на экссудацию показало, что 
у крыс в опытной группе через три часа по-
сле  введения  уксусной  кислоты  объем  экс-
судата был существенно ниже по сравнению 
с  показателем в контрольной группе и сопо-
ставим по сравнению с показателем в группе 
животных,  получавших  диклофенак  натрия 
(табл. 1).
Таблица 1. 
Влияние эфирного масла аянии кустарничковой и диклофенака натрия 
                           на количество образовавшегося экссудата в брюшной полости
Примечание. 
+
  р<0,05 по сравнению с контролем
99
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ВОПРОСЫ  ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ

Оценка  противовоспалительной  активно-
сти  показала,  что  эфирное  масло  аянии  ку-
старничковой  тормозило  развитие  гранулем. 
Из табл. 2 видно, что у крыс с гранулемным 
воспалением  эфирное  масло  аянии  кустар-
ничковой  обладает  выраженной  антиэкссу-
дативной  и  антипролиферативной  видами 
активности,  сопоставимой  с  диклофенаком 
натрия.  Введение  эфирного  масла  аянии  ку-
старничковой приводило к угнетению проли-
ферации грануляционно-фиброзной ткани на 
21 % (в группе с диклофенаком натрия на 37 
%). Кроме  того,  наблюдали  снижение массы 
экссудата гранулем в группе животных, полу-
чавших  эфирное  масла  аянии  кустарничко-
вой на 18 %, а в группе животных, получав-
ших диклофенак натрия – на 16 % (табл. 2).
Таблица 2. 
Влияние эфирного масла аянии кустарничковой и диклофенака натрия 
на экссудацию и пролиферацию у крыс с гранулемным воспалением
Примечание. 
+
  р<0,05 по сравнению с контролем
Таким  образом,  в результате  проведенных 
экспериментов  выявлено,  что  энтеральное 
введение  эфирного  масла  аянии  кустарнич-
ковой крысам снижает отек, вызванный вну-
трибрюшинным  введением  раствора  уксус-
ной  кислоты,  не  уступая  по  эффективности 
диклофенаку натрия. На модели гранулемно-
го  воспаления  показано,  что  эфирное  масло 
аянии кустарничковой обладает выраженной 
антиэкссудативной  и  антипролиферативной 
видами  активности,  сопоставимой  с  дикло-
фенаком натрия.
ЛИТЕРАТУРА
1.  Лещинский, А.Ф. Лечение воспалительных забол. (противовоспалительные препараты и 
их сочетания) / А.Ф. Лещинский, З.И. Зуза. – Киев, 1985. – 112 с.
2.  Мартынов, А.М. Фармакогностическое изучение растений рода монарды  //Автореф. дис. 
..канд.наук. – Тбилиси, 1976. – 19 с.
3.  Николаевский, Н.Д. Биологическая активность эфирных масел / Н.Д. Николаевский , А.Е. 
Еременко, И.К. Иванов. – М., 1987. – 144 с.
4.  Максютина, Н.П. Растительные средства / Н.П. Максютина. – Киев, 1983. – 156 с.
5.  Тютюник, В.И. Антимикробное действие эфирных масел, выделенных из растений / В.И 
Тютюник, Н.Г. Пономарева, Ю.С. Кривошеин, А.И. Рамаскевич. – Симферополь, 1987. – 
33 с.
6.  Гейхман,  Л.З.  Фитонциды  и  сердечно-сосудистые  заболевания  /  Л.З.  Гейхман.  –  Киев, 
1982. – 197 с.
7.  Amvam, P.H. Antimicrobial activity of essential oils of plant in Camerun / G Lamaty, P. Bouchet 
// Phytoparasitica. – 1997. – V. 1. – P. 18–24
8.  Demyttenaere, J.C.R. Antifungal properties of Essential Oil components / J.C.R Demyttenaere, 
Н.М. Willemen, M. del C Herrera, R. Verhe // Progress in Essential Oil Res., Proceedings of the 
28-th Internat. Symp. Essential Oils, Eskisechir. – Turkey, 1–3 Sept. 1997. – P. 183–199
9.  Agshikar, N. V. Pharmacology and acute toxicity of essential oil extracted from Zanthoxylum 
burunga / N. V. Agshikar, G. J Abraham // Indian J. Med. Res. – 1994. – V. 60, № 5. – P. 757–762
10.  Халматов, Х.Х. Лекарственные растения Центральной Азии / Х.Х. Халматов, И.А. Харла-
мов, З.И. Мавланкулова. – Ташкент, 1998. – С. 243–244
11.  Атажанова,  Г.А.  Фитопрепараты  на  основе  эфирных  масел  растений  флоры  Казахстана      
/ Г.А. Атажанова // Практ. фитотер.:  Спец. выпуск. – 2009. – С. 52–64
12.  Рук-во  по  эксперим.  (доклиническому)  изучению  новых  фармакологических  веществ         
/ В.П. Фисенко [и др.]. – М., 2000. – 398 с.
13.  Лакин Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. – М.: Высш. шк., 1980. – 293 с.
100
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ТƏЖІРИБЕЛІК   МЕДИЦИНА  МƏСЕЛЕЛЕРІ

© Коллектив авторов, 2012
УДК 543.64:615.32
 
М.З.Шайдаров, А.Т. Казбекова, Д.Д Мухамбетов, С.М.Адекенов, Т.С.Сейтембетов 
АО «Медицинский университет Астана»
АО «Международный научно-производственный холдинг «Фитохимия». Караганда
ТАБИГИ ӨСІМДІК ҚОСЫЛЫСТАРЫ МЕН ОЛАРДЫҢ АНТИОКСИДАНТТЫҚ 
БЕЛСЕНДІЛІКТЕРІ АРАСЫНДАГЫ БАЙЛАНЫСТЫ ЗЕРТТЕУ
М.З.Шайдаров, А.Т. Казбекова, Д.Д Мухамбетов, С.М.Адекенов, Т.С.Сейтембетов 
Компьютерлік  бағдарламаны  қолдана  отырып  табиғи  терпеноидтардың  бір  қатары 
зерттелінді, сонымен қатар in vitro жəне in vivo экспериментінде Capparis Spinosa өсімдігінің 
биологиялық  белсенділігі  анықталынды.  Өсімдіктен  бөлініп  алынған  органикалық 
қосылыстардың  молекулалық құрылысы мен  белсенділіктері арасындағы байланыстың бар 
болуы белгіленді.
STUDY OF INTERCONNECTION BETWEEN THE NATURE 
OF PLANT COMPOUNDS AND THEIR ANTIOXIDANT ACTIVITY
M.Shaidarov, A. Kazbekovа, D.Mukhambetov, S.Adekenov, T.Seitembetov
List of natural terpenoids were investigated using computer software, and also the biological ac-
tivity of extracts of Capparis Spinosa was determined by in vitro and in vivo experiments. Presence 
of interconnection between molecular structure and biological activity of organic compounds from 
plant source was educed. 
И
звестно,  что  природные  тритерпенои-
ды и полифенольные соединения при-
родного происхождения, в частности, тритер-
пеноид аллобетулин (А), его производные  и 
флавоноиды обладают биологической актив-
ностью широкого спектра действия[1]. В свя-
зи с этим необходимо расширять круг новых 
веществ данного ряда для выявления наибо-
лее эффективных представителей указанных 
классов  в  плане  потенциальной  активности. 
Также  актуален  вопрос  расширения  спектра 
биоактивности  этого  ряда  органических  со-
единений  растительного  происхождения.  В 
этом  направлении  определенный  интерес 
представляет  изучение  антиоксидантной  ак-
тивности  (АОА)  данных  соединений  совре-
менными  методами,  а  также  установление 
взаимосвязи «структура - активность» в экс-
периментах in vitro и in vivo.
Новые  гетероциклические  системы  пред-
ставляют  интерес  как  важный  источник  ин-
новационных  фармацевтических  продуктов. 
Более 70% оригинальных фармацевтических 
субстанций, введенных в медицинскую прак-
тику  в  1981-2006  гг.,  были  разработаны  на 
основе  природных  соединений[2].  Так  как 
большинство  природных  соединений  прояв-
ляет  плейотропные  биологические  эффекты 
путем  взаимодействия  с  множеством  мише-
ней  в  организме,  оценка  видов  биоактивно-
сти  на  ранних  стадиях  исследований  откры-
вает  возможность  сформулировать  критерии 
для отбора перспективных базовых структур 
новых лекарств. Для прогноза биологической 
активности  химических  соединений  широко 
используются методы, основанные на струк-
туре  макромолекулы-мишени.  Однако  боль-
шинство компьютерных тестов сфокусирова-
ны на одной мишени или на специфическом 
фармакологическом  эффекте,  тем  самым  не 
могут быть использованы для прогноза плей-
отропного действия вещества.
101
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ВОПРОСЫ  ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ

ЦЕЛЬ
Изучение  потенциальной  биологической 
активности  с  помощью  программы  PASS 
(Prediction  of Activity  Spectra  for  Substances) 
ряда  терпеноидов,  а  также  активности  экс-
трактов  каперса  колючего  (Capparis  Spinosa) 
in vitro и in vivo.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Расчеты    выполнены  с  помощью  про-
граммы  PASS,  при  которой  биологиче-
ская  активность  описывается  по  принципу 
«активно»/«неактивно»,  что  позволяет  инте-
грировать  в  такой  выборке  информацию  на 
основе  различных  источников,  где  наиболее 
вероятные  активности  находятся  в  верхней 
части  списка[3].  В  последние  годы  как  аль-
тернативная  модель  испытания  токсичности 
на  ранних  этапах  разработки  лекарственных 
средств  и  для  определения  биологически 
активных  природных  веществ  используется 
zebrafi sh  (Z)  методика.  Оценка  результатов 
исследования  осуществляется  в  микроскоп, 
эмбрионы  являются  прозрачными,  что  по-
зволяет проводить визуализацию внутренних 
органов  и  тканей.  Исследуемые  соединения 
и экстракты растения могут быть добавлены 
в  воду,  в  которой  обитают  Z,  которые  вса-
сываются  через  кожу  и  жабры  в  зачаточном 
состоянии  и  через  пищеварительную  систе-
му  на  более  поздних  личиночных  стадиях. 
Также  определенный  интерес  представляет 
цитотоксическая активность соединений, вы-
деленных из растительного сырья. В соответ-
ствии с методикой емкость на 55 мл заполня-
ли  искусственной морской  водой  и  добавля-
ли 200 мг яиц Artemia salina. Выдерживали в 
течение 3-х дней при мягкой подаче воздуха 
до  выведения  рачков  из  яиц.  Одну  сторону 
трубки покрывали алюминиевой фольгой  и 5 
мин спустя  личинки, которые собирались на 
яркой  стороне  делительной  воронки,  выни-
мались  пипеткой.  Подсчитывали  количество 
мертвых  личинок.  Для  отрицательного  кон-
троля добавляли 10 мл диметилсульфоксида. 
После 24 ч инкубации и дальнейшем выдер-
живании  микроплошки  в  течение  24  ч  (для 
обеспечения  неподвижности)  посчитывали 
мертвые личинки под микроскопом. Образцы 
с высокой цитостатической эффективностью, 
т.е. менее 5% выживших личинок, проверяли 
снова с концентрациями 50, 10, 5 и 1 мг/мл. 
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
С помощью программы PASS нами выпол-
нен  скрининг  возможных  видов  биологиче-
ской активности для синтезированных новых 
производных  А.  Результаты  компьютерного 
скрининга  наиболее  вероятно    проявляемых 
видов активности для терпеноидов практиче-
ски совпадает. Анализ литературных данных 
показал, что в настоящее время отсутствуют 
систематические данные об антиоксидантной  
активности  аллобетулина и его производных, 
что  обуславливает  полезность  полученных 
расчетных  данных.  Например,  ингибирую-
щая  активность  к  фосфатазе  ряда  терпенои-
дов  составляет  0,757;  0,743;  0,701  и  этот  же 
ряд  веществ  проявляет  эффект  ингибитора 
экспрессии теломеразы обратной транскрип-
ции  в  следующих  величинах:  0,723;  0,711; 
0,706  и  0,657  соответственно.  Этот  факт  од-
нозначно  указывает  на  наличие  взаимосвязи 
между  молекулярной  структурой  и  приро-
дой  биологической  активности.  Нами  про-
ведены  исследования  по  определению  АОА 
с  использованием    радикала  1,1-дифенил-2-
пикрилгидразила, при этом данная методика 
позволяет  быстро  и  достоверно  провести  in 
vitro  скрининг на активность. Для всех син-
тезированных  производных  были  рассчита-
ны  АОА  в  диапазоне  концентраций  0,2-2,0 
ммоль/л. Принято считать, что эффективный 
коэффициент  ингибирования  IC
50 
наиболее 
точно  характеризует  активность  исследуе-
мых  органических  соединений  по  отноше-
нию  к  экзогенным  частицам  радикальной 
природы.  В  качестве  стандарта  был  исполь-
зован  синтетический  антиоксидант  Trolox
®

Значения  IC
50
  указывают  на  минимальное 
количество  соединения,  необходимого  для 
ингибирования 50% радикала в реакционной 
смеси.  Диапазон  значений  IC
50
  достаточно 
широк  и  колеблется  в  интервале  от  1,43  до 
66,09 ммоль/л, что позволяет провести нали-
чие  корреляции  влияния  заместителей  в  мо-
лекуле на исследуемую активность. 
Установлено  наличие  у  экстракта  каперса 
колючего  свойств,  оказывающих  ингибиру-
ющий  эффект  на  развитие  острого  воспали-
тельного процесса. Причем наиболее эффек-
тивным антиэкссудативным действием обла-
дал  экстракт  в  дозе  250  мг/мл.  В  результате 
проведенных  экспериментов  установлено, 
что  энтеральное  введение  экстракта  каперса 
колючего  крысам  снижает  отек,  вызванный 
субплантарным  введением  раствора  форма-
лина,  внутрибрюшинным  введением  уксус-
ной  кислоты,  не  уступая  по  эффективности 
диклофенаку натрия.  Нами выполнен анализ 
АОА спиртовых экстрактов корней и надзем-
ной  части  каперса  колючего.  IC
50 
экстракта 
надземной  части  каперса  колючего  в  2  раза 
меньше  по  сравнению  с  экстрактом  корней: 
1,422±  0,011  и  2,896±  0,08  соответственно, 
что  согласуется  с  данными  по  содержанию 
флавоноидов  в  соответствующих  эстрактах: 
0,159±0,004мг/мл  и  0,031±  0,001мг/мл.  Вве-
дение метильной группы  в структуру веще-
102
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ТƏЖІРИБЕЛІК   МЕДИЦИНА  МƏСЕЛЕЛЕРІ

ства    уменьшает  активность  соединения  в 
36  раз,  дальнейшее  удлинение    алкильного 
заместителя  от  -CH
3
  до  -C
5
H
11
  повышает  ак-
тивность  в  3,5  раза[4].  С  целью  установле-
ния  биологической  активности  терпеноидов 
и  экстракта  каперса  колючего  был  проведен 
ряд тестов in vivo. Способ zebrafi sh обладает 
рядом неоспоримых преимуществ, в частно-
сти, эмбрионы Z имеют наиболее важные ор-
ганы и сердечно-сосудистую, нервную и пи-
щеварительную системы, которые имеются в 
организме  млекопитающих.  На  протяжении 
периода эмбрионального развития продолжи-
тельностью менее недели, что обуславливает 
оперативность  скрининга.  Для  проведения 
опыта  взято  менее  нанограмма  соединения 
на  одно  животное.  Каждая  пара  взрослых  Z 
в  течение  6  дней  воспроизводит  до  200-300 
эмбрионов,  что  делает  модель  применимой 
для  проведения  параллельных  исследований 
большого числа  биологически активных со-
единений.  Как правило, лабораторный  скри-
нинг  токсичности  in  vivo  проводят  на  таких 
млекопитающих как мыши, крысы и собаки, 
которые    весьма  дорогостоящие  и  требуют  
времени  для  испытания  веществ.  Изучение 
антиоксидантного  эффекта    соединений  на 
основе аллобетулина  современными  метода-
ми,  а  также  установление  влияния  молеку-
лярной  структуры  на  биологическую  актив-
ность  в экспериментах in vitro и in vivo пока-
зало перспективность этого направления. На 
основании проведенных экспериментов мож-
но  предположить,  что  соединение  имеет  по-
тенциальную нейротоксическую активность, 
так как личинки остаются живыми.
Таким  образом,  полученные  результаты 
указывают на потенциальную антиоксидант-
ную  активность  экстракта  каперса  колючего 
и наличие взаимосвязи между молекулярной 
структурой  природных  соединений,  содер-
жащихся в экстракте каперса колючего, и их 
биоактивностью. 
ЛИТЕРАТУРА
1.  Mashentseva A.A.,  Wim  Dehaen,  Seitembetov  T.S.,  Seitembetova A.J.  Comparison  of  the  an-
tioxidant Activity of the different Betula pendula Roth. Extracts from Northern Kazakhstan // J  
Phytol.-2011.-V.3(1).- P.18-25
2. Зенков Н.К., Кандалинцева Н.В., Ланкин В.З. и др. Фенольные биоантиоксиданты. -Ново-
сибирск, 2003.- 328с.
3. Меньшикова Е., Ланкин В.З., Зенков Н.К. и др. Окислительный стресс// Прооксиданты и 
антиоксиданты. –М., 2006.-556с.
4. Mashentseva A.A., Yushina L.V., Kazbekova A.T. et al. Investigation of the birch extracts effect 
on the phospholipids level in oxidation stress// 8 Intern. Symр. Chem. Natural Compounds, 15-17 
June 2009, Eskisehir(Turkey).- P.146.
103
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ВОПРОСЫ  ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ

©Коллектив авторов, 2012
УДК 633.88.579
К.Х. Алмагамбетов, Н.Б. Молдагулова, З.С. Сармурзина,
С. А.  Садуахасова, Г.К. Абитаева, Б.Б. Калдарбекова
РГП «Республиканская коллекция микроорганизмов КН МОН РК». Астана
САЛСОКОЛЛИННІҢ ІШЕК МИКРООРГАНИЗМДЕРІНЕ ƏСЕРІ
К.Х. Алмагамбетов, Н.Б. Молдагулова, З.С. Сармурзина,С. А.  Садуахасова, 
Г.К. Абитаева, Б.Б. Калдарбекова
Əр-түрлі  мөлшердегі  салсоколлин  препаратының  лактобацилл  культураларының 
өміршенділігіне 
жəне 
анатагонистік 
белсенділігіне, 
S. 
аureus 
культурасының 
плазмокоагулазалық  белсенділігіне  жəне  Str.рyogenes  гемолитикалық  белсенділігіне  əсері 
зерттелген.
 THE INFLUENCE OF SALSOCOLLIN ON INTESTINAL MICROORGANISMS
K.AlmagambetovN. Moldagulova, Z.Sarmurzina, S.Saduakhasova,G.Abitajeva,
B. Kaldarbekova
The  effect  of  the  drug  salsoсollin  in  different  concentrations  on  the  viability  and  antagonistic 
activity of lactobacilli, plasma coagulation activity of S. aureus, and hemolytic activity of Str. pyo-
genes. 
Г
епатопротекторный  препарат  расти-
тельного  происхождения  «Салсокол-
лин»  создан  на  основе  солянки  холмовой 
(Salsolacollina  Pall.).Избирательное  терапев-
тическое  действие  на  функции  печени  об-
условлено  высокой  антиоксидантной  актив-
ностью  фитопрепарата,  связанной  с  присут-
ствием флавоноидов.  Последние стимулиру-
ют антиоксидантную активность гепатоцитов 
за  счет  увеличения  каталазы  и  уменьшения 
содержания  малоно-вого  диальдегида  в  тка-
ни  печени[1,2].  Наряду  с  холелитическим, 
холеспазмолитическим  и  холекинетическим 
эффектом,  салсоколлин  оказывает  положи-
тельное  влияние  на  липидный  и    белковый 
обмен.  Также известно  нормализующее вли-
яние  препарата  на  функцию  поджелудочной 
железы при сахарным диабете[3,4].    Вместе 
с  тем  хорошо  известно  то,  что  при  патоло-
гии  пищеварительной  системы  имеет  место 
кишечный  дисбактериоз  [5],  осложняющий 
течение  основного  заболевания.  Поэтому 
практически значимо знание возможного по-
зитивного  либо  негативного  влияния  салсо-
коллина на нормальную микрофлору кишеч-
ника, особенно на ее резидентных представи-
телей –лактобацилл [6].
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
В  работе  использовали:  Lactobacillus  fer-
mentum,  Staphylococcus  aureus,  Streptococcus 
pyogenes,  Escherichia coli,  Klebsiella ozaenae,  
E. coli, Ser. marcescens, Pr.mirabilis и Candida 
albicans;
Фитосубстанции - сухой СО
2
-экстракт сал-
соколлина;
Питательные среды: МРС-4, МРС-5, СПА, 
СПБ (Hi-Media, Индия) и 5% кровяной агар.
Оценку  жизнеспособности  и  биологиче-
ские  свойства  микроорганизмов  проводили 
при культивировании их на питательных сре-
дах,  содержащих  различные  концентрации 
салсоколлина. Салсоколлин разводили в 0,9% 
физиологическом  растворе  до  концентраций 
0,02;  0,004;  0,0008;  0,00016  и  0,000032  г/мл. 
Суточную  культуру  индикаторных  бактерий 
вносили  в  пробирки  с  бульоном    СПБ  (Hi-
Media, Индия) в количестве 100 мкл с титром 
клеток  S. аureus — 17×10
10
 КОЕ/мл,  Str. pyo-
genes—  2×10
5
  КОЕ/мл,    L.  fermentum  –  10
9
 
КОЕ/мл,    Kl.  оzaenae  -12×10
10
  КОЕ/мл  и    E. 
coli 5×10
10
 КОЕ/мл.
  Определение  жизнеспособности  микро-
организмов  проводили  путем  посева  взвеси 
104
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ТƏЖІРИБЕЛІК   МЕДИЦИНА  МƏСЕЛЕЛЕРІ

бактерий  по  методу  Miles&Misra  на  агари-
зованную  среду.  Для этого  проводили   деся-
тикратные  разведения  бактерии,  высевали 
на  агаризованные  среды  МРС-4  и  СПА  в 
двух  повторностях.  Инкубацию  проводили 
при температуре  37°С в течение 24-48 ч.   
Антагонистическую активность L. fermentum 
определяли после культивирования их на пи-
тательных  средах,  содержащих  салсоколлин 
по отношению к тест-культурам: E. coli, Ser. 
marcescens, Pr.mirabilis, Kl. ozaenae, S. aureus 
и Candida albicans методом отсроченного ан-
тагонизма.  Для  этого  48-  часовые  культуры 
L.  fermentum    пересевали  методом  укола  на 
чашки Петри с агаризованной средой МРС-5. 
После  2-х  суточной  инкубации  лактобацилл 
совместно  с  различными  концентрациями 
салсоколлина  при  37
0
С,  выросшие  колонии 
микроорганизмов инактивировали, выдержи-
вая чашки Петри в парах хлороформа в тече-
ние  30 мин.,  с  последующим   20 мин. «про-
ветриванием».  Затем  поверхность  чашек  за-
ливали вторым тонким слоем расплавленной 
и остуженной до +46ºС  МРС-5, содержащей 
0,7%  агара  и  смешанной  со  взвесью  тест-
культуры  (0,1  мл  в  концентрации  1
.
10

мкр.
кл./мл).  Об  антагонистической  активности 
судили по зоне отсутствия роста тест-культур 
вокруг колоний лактобацилл.
Для изучения плазмокоагулазной активно-
сти St. aureus использовали сухую цитратную 
кроличью  плазму  (ЗАО  «БИОЛЕК»,  Украи-
на).  Плазму  в  разведении 1:5  с  добавлением 
различных  концентраций  салсоколлина  раз-
ливали в стерильные пробирки по 0,5 мл и в 
ней  суспендировали  100 мкл  суточной куль-
туры St. aureus. Для исключения спонтанного 
свертывания  плазмы,  параллельно  ставили 
контроли  (плазма  без  внесения    культуры  и 
плазма без внесения салсоколлина). Пробир-
ки помещали в термостат при 37°С. Учет ре-
зультатов проводили визуально через каждые 
2, 3, 6, 18 и 24 ч по образованию сгустка свер-
нувшейся плазмы.
Определение  гемолитической  активности 
Str.  pyogenes  осуществляли  путем  посева  на 
5%  кровяной  агар,  содержащий  различные 
концентрации салсоколлина. Посев проводи-
ли уколом, чашки  Петри помещали в термо-
стат при 37°С  на 24 - 48 ч. Учитывали резуль-
таты  по  образованию  зон  гемолиза  вокруг 
колоний в сравнении  с контролем (среда без 
добавления салсоколлин).

Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   12   13   14   15   16   17   18   19   ...   31




©emirsaba.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет