Қазақстан республикасы білім жəне ғылым министрлігі м. Ж. Еркебаев, Қ. С. Құлажанов, Д. Б. Тəттібаева, А. Ы. Мəуленов
Амплификация өнімдерін детектрлеу
жүктеу/скачать 1,24 Mb. Pdf көрінісі
|
- Бұл бет үшін навигация:
- 6-сурет.
| Амплификация өнімдерін детектрлеу. Бұл кезеңде идентифи-
кациялау мақсатында ПТР өнімдерінің қоспаларына талдау жасала- ды. Əртүрлі əдістер қолданылады, соның ішінде: - агарозды гельдегі горизонтальды электрофорездің классикалық əдісі; - полиакриламидті гелдегі вертикальды электрофорез əдісі; - гибридизациялы зондтар əдісі; - «шынайы уақыттағы» ПТР Фрагмент өлшемі «Кішкене басқыш» ПТР фрагменттері 6-сурет. Агарозды гельдегі ПТР өнімдерінің электрофоретикалық бөлінуі Агарозды гельдегі горизонтальды электрофорез əдісі. Қазіргі уақытта ДНҚ молекуласын өлшемі бойынша бөлуге негізделген электрофорез əдісі кеңінен таралған. Бұл үшін ага- розды гель пластинасын дайындайды, ол электрофорездік буфер- 65 де ДНҚ-ның арнайы бояуышы қосылған ерігеннен кейін қатып қалған агароздан тұрады, оларға мысалы, ДНҚ-ның арнайы бо- яуышына екітізбекті ДНҚ фрагменттерімен төзімді қосылыстар түзетін бромды этидия жатады. Гельге құю кезінде тарақтар көмегімен арнайы шұңқырлар қалыптастырады, кейін бұл шұңқырларға амплификация өнімдері салынады. Гель пластинасын горизонтальды гель-электрофорезге арналған аппаратқа салады жəне тұрақты кернеу көзіне қосады. Теріс зарядталған ДНҚ гельде «минустан» «плюсқа» қарай қозғала бастайды. ДНҚ-ның өте қысқа молекулалары ұзын молекулаларға қарағанда, жылдам қозғалады, ал бір өлшемдегі молекулалар бірдей жылдамдықпен қозғалады. Гельдегі ДНҚ-ның қозғалу жылдамдығына агароз концентрациясы, электр өрісінің кернеулігі, температура, электрофорездік буфер жəне аз деңгейде ДНҚ құрамы əсер етеді. 10 минуттан 1 сағатқа дейін созылатын электрофорез аяқталғаннан кейін гельді ультракүлгін диапозонда (254-310 нм) жарық шығаратын трансиллюминатор фильтріне салады. ДНҚ жұтатын ультракүлгін энергиясы 260 нм аймағында бояуыш мо- лекуласына беріледі, ДНҚ жұтатын ультракүлгін энергиясы бо- яуыш молекулаларын көрінетін спектрдің қызғылт-қызыл облы- сында сəуле шашуға (флуорисцерлеу) мəжбүрлейді, бұл, агарозды гельде амплификациялық қоспаны электрофоретикалық түрде бөлгеннен кейін, оларды жарқыраған жолақтар ретінде тіркеуге мүмкіндік береді ( 6-сурет). жүктеу/скачать 1,24 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|